小鼠肝脏原位肝癌模型构建全攻略
2026-07-27 来源:本站 点击次数:100
在生命科学的研究领域中，动物模型对于探索疾病机制、研发治疗方法起着举足轻重的作用。今天，咱们就来深入了解一下小鼠肝脏原位肝癌模型，这可是科研人员研究肝癌的得力助手。无论是药物研发，还是探索肝癌转移的秘密，这个模型都有着不可替代的价值。
一、常用建模方法大盘点
【直接注射法】
这种方法操作起来简单直接。科研人员通过腹腔或直接在肝脏注射 50μl 的 H22 肝癌细胞悬液，就能让小鼠长出肿瘤，而且成瘤率高达 100%！术后短短 7 天，就能看到肝脏上出现结节，速度相当快。不过呢，它也有一些小"缺点"，可能会引发腹腔粘连、腹水，还容易导致肿瘤转移，就像是一把双刃剑。
【组织块移植法】
组织块移植法是把肿瘤组织块植入肝脏，它的成瘤率同样是 100%。和直接注射法相比，它对腹腔脏器的影响更小，能给实验提供更稳定的环境。但它也有个小麻烦，就是操作时间会长一些，大概需要 5.68 分钟，而直接注射法只需要 3.3 分钟。不过，要是你想做低转移率的实验，那它就是个不错的选择。
【夹心法】
夹心法专门适用于 BALB/c 裸鼠。先给裸鼠用异氟烷麻醉，然后再移植肿瘤组织块。这种方法不仅成瘤率高，还不会让肿瘤在腹腔广泛种植，动物死亡率也低，特别适合大规模的药效学研究，科研人员可以一次测试好多药物呢！
⭐提示：我们在原文基础上补充说明——基因编辑模型可通过体内原位编辑肝细胞基因（如 TP53、MYC 等），构建 25 种异质性肝癌模型，模拟人类 HCC、ICC 等分型，支持精准药物测试。
二、技术亮点大比拼
三、模型应用场景解读
四、原位肝癌动物模型实例（H22 小鼠肝癌细胞原位移植瘤）
💡实验材料准备
🔍实验方法步骤
H22 肝癌细胞复苏及培养：
37℃水浴复苏细胞，从液氮罐取出细胞的时候，要检查冻存管有没有松动。细胞融化后，在无菌的环境下打开冻存管，把细胞悬液吸出来，放到装有 5ml 含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 完全培养基的离心管里，1000rpm 离心 5 分钟，倒掉上清液，再加入新的完全培养液，吹打均匀，最后放到细胞培养瓶里，在 CO₂培养箱（37℃，5% CO₂）中培养。在培养过程中，每天都要观察细胞的生长状态。等细胞密度达到 80–90% 的时候，就可以传代。
🍀小鼠肝癌细胞原位移植瘤模型构建：
一、常用建模方法大盘点
【直接注射法】
这种方法操作起来简单直接。科研人员通过腹腔或直接在肝脏注射 50μl 的 H22 肝癌细胞悬液，就能让小鼠长出肿瘤，而且成瘤率高达 100%！术后短短 7 天，就能看到肝脏上出现结节，速度相当快。不过呢，它也有一些小"缺点"，可能会引发腹腔粘连、腹水，还容易导致肿瘤转移，就像是一把双刃剑。
【组织块移植法】
组织块移植法是把肿瘤组织块植入肝脏，它的成瘤率同样是 100%。和直接注射法相比，它对腹腔脏器的影响更小，能给实验提供更稳定的环境。但它也有个小麻烦，就是操作时间会长一些，大概需要 5.68 分钟，而直接注射法只需要 3.3 分钟。不过，要是你想做低转移率的实验，那它就是个不错的选择。
【夹心法】
夹心法专门适用于 BALB/c 裸鼠。先给裸鼠用异氟烷麻醉，然后再移植肿瘤组织块。这种方法不仅成瘤率高，还不会让肿瘤在腹腔广泛种植，动物死亡率也低，特别适合大规模的药效学研究，科研人员可以一次测试好多药物呢！
⭐提示：我们在原文基础上补充说明——基因编辑模型可通过体内原位编辑肝细胞基因（如 TP53、MYC 等），构建 25 种异质性肝癌模型，模拟人类 HCC、ICC 等分型，支持精准药物测试。
二、技术亮点大比拼
| 方法 | 优势 | 局限 |
| 细胞注射法 | 快速、肝内多转移结节 | 腹水率高达40%-100% 易引发重度腹腔粘连 |
| 组织块法 | 减少腹水和脏器粘连 | 需精细操作，适合长期观察 |
| 基因编辑模型 | 模拟临床肝癌异质性 | 构建周期相对较长，技术要求高 |
三、模型应用场景解读
- 药效评估：直接注射法凭借高成瘤率的优势，在抗肝癌药物筛选中发挥着重要作用。科研人员可以用它快速测试各种药物对肿瘤的抑制效果，为新药研发节省大量时间。
- 转移机制研究：腹水型 H22 细胞注射模型（B 组）的肝转移率有 40%，这个特点让它成为研究肿瘤侵袭性的"宠儿"。科研人员可以通过这个模型，深入探索肿瘤是怎么在肝脏里"安营扎寨"、转移扩散的。
- 异质性与分型研究：基因编辑模型库可太强大了，它能匹配不同的分子亚型，像 M1 - M3 等。有了它，科研人员就能更深入地研究不同亚型肝癌的特点，探索更适合的个体化治疗方案，为未来攻克肝癌带来新希望。
四、原位肝癌动物模型实例（H22 小鼠肝癌细胞原位移植瘤）
💡实验材料准备
- 实验动物：选用 SPF 级别免疫缺陷的 BALB/c 裸鼠，6–8 周龄，雌性，体重在 18–20g 之间。饲养环境很讲究，要清洁无尘、空气新鲜，温度保持在 20–24℃，相对湿度 40–70%，噪音也要控制在 85 分贝以下。饲养的时候，每周要换 2 次垫料，加 4 次饲料，保证垫料干燥、饲料新鲜。买回来后，还要让它们适应环境 1 周，才能开始做实验。
- 实验细胞株：构建模型的关键"角色"，需对细胞株供应商进行严格考察。
🔍实验方法步骤
H22 肝癌细胞复苏及培养：
37℃水浴复苏细胞，从液氮罐取出细胞的时候，要检查冻存管有没有松动。细胞融化后，在无菌的环境下打开冻存管，把细胞悬液吸出来，放到装有 5ml 含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 完全培养基的离心管里，1000rpm 离心 5 分钟，倒掉上清液，再加入新的完全培养液，吹打均匀，最后放到细胞培养瓶里，在 CO₂培养箱（37℃，5% CO₂）中培养。在培养过程中，每天都要观察细胞的生长状态。等细胞密度达到 80–90% 的时候，就可以传代。
🍀小鼠肝癌细胞原位移植瘤模型构建：
- 小鼠肝原位手术准备：麻药准备：戊巴比妥钠 7mg/mL，注射体积为 10ml/kg。用 75% 酒精和碘伏对手术区进行消毒。
- 手术步骤：在超净工作台里，把小鼠平卧位固定在鼠板上，用胶带固定好四肢。消毒后，在左腹腔做一个大约 1cm 长的横断面小切口（这里用裸鼠演示实验操作，方便观察）。用无菌生理盐水润湿过的棉签把肝左叶轻轻拉出来，让它完全暴露。用 25μL 的微量注射器取 10μL 细胞悬液（浓度是 1.5×10⁶/ml），缓慢注射到肝左叶尾部，注射完后，让注射器在肝左叶停留 1–2 分钟再拔出来。注射成功后，用棉签按压止血 1–2 分钟，然后把肝脏放回小鼠体内原位。最后，用可降解的缝合线缝合腹膜和皮肤，把小鼠放在 37℃ 恒温加热垫上，等它恢复自由行动后，再放回笼子里。
- 造模后观察：大概过 3 周左右，就能在小鼠肝脏位置摸到肿瘤了。解剖后会发现肝脏上都长出了肿瘤。造模后的小鼠可以用 IVIS Lumina LT 设备采集信号数据，科研人员就能通过这些数据，进一步了解肿瘤的生长情况啦。
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