CAR-T：为免疫细胞装上识别肿瘤的“导航系统”
CAR-T细胞药物的核心，是把患者或供者的T细胞在体外进行基因改造，使其表达嵌合抗原受体（CAR），从而获得识别特定肿瘤抗原的能力。经过扩增并回输后，这些“被重新编程”的免疫细胞能够主动寻找靶细胞，完成识别、激活、增殖和杀伤，因此常被称为具有持续作用能力的“活细胞药物”。

为什么必须准确检测CAR载体拷贝数？
载体拷贝数（Vector Copy Number，VCN）通常指平均每个细胞基因组中整合的CAR载体拷贝数量。VCN过低，可能导致CAR表达不足或细胞功能不稳定；VCN过高，则可能增加载体插入原癌基因附近或影响抑癌基因的概率。因此，它既是转导工艺优化指标，也是CAR-T成品放行和安全风险评估中的关键质量属性。

中国食品药品检定研究院于2018年发布的《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》提出：对于CAR-T细胞基因组中的病毒载体拷贝数，“目前认为不高于5拷贝/细胞是可以接受的”。

文件同时强调，这一结果反映的是细胞群体的平均值，并不代表每一个单细胞的实际拷贝数。实际产品的放行标准还应结合获批注册标准、生产工艺能力、批次数据和风险评估进行确定。

艾普拜数字PCR：精准检测CAR-T拷贝数

艾普拜生物与精翰生物合作，建立了“双CAR靶标＋内参”的三重荧光数字PCR检测方案，降低了单一靶区突变、缺失或扩增异常带来的检测风险。相比流式细胞法、荧光定量PCR法，具有更好的直接定量能力与批间可比性，为保障CAR-T细胞药物的安全性提供了更合适的检测方法学参考。

1.双CAR靶标 + 内参：一次反应完成三重检测

VCN计算公式：

相较于只检测一个CAR靶区，双靶标设计能够降低单一靶区突变、缺失或扩增异常带来的检测风险，同时可对载体结构及定量结果进行交叉验证，提高检测结果的可靠性。

2.线性、准确度、特异性验证

CAR靶标设置了由高浓度至2 copies/μL的系列梯度，人ALB内参覆盖1～10⁵ copies/μL，用于评估不同浓度范围内的线性表现。

☑ 检测体系不仅能够覆盖较高载体拷贝样本，也能在低拷贝区域保持较好的定量线性，为接近产品放行限度或低丰度样本的检测提供基础。

☑ 在准确度和特异性验证中，阳性对照内参的理论浓度为3030 copies/μL，实测结果为3021 copies/μL，理论值与实测值的高度一致；阴性对照实测结果为0。

3.抗干扰能力

为评估复杂生物样本对检测结果的影响，案例选取3份独立健康人全血，提取基因组DNA后分别加入中、低浓度CAR靶标。

☑ 结果显示：不同个体全血DNA中的两个CAR靶标实测结果与理论值保持良好一致，人基因组背景未造成明显定量偏移，表明该检测方案能够较好地耐受不同个体全血基质的影响。

4.CAR-T细胞Spike in外周血检测结果

☑ 在该实验条件下，检测体系能够对低至0.5CAR-T cells/μL的加标样本实现检测，适用于CAR-T成品放行、体内药代微量细胞监测、骨髓低丰度样本检测。

合作伙伴

“熙宁|精翰生物”是一家以分析科学为核心能力，专注于为新药临床与非临床研究提供专业一站式技术服务的中心实验室。公司主营业务包括生物分析服务，生物标志物研究, 生化与免疫检测以及中心实验室样本管理。

公司团队规模超过400人，科学家团队超过50%拥有博士或硕士学位。截至目前，公司已成功支持10余款创新药/生物药获批上市，覆盖重组蛋白、单抗、双抗、细胞治疗产品等各类新型生物制品，包括全球首创重组抗破伤风毒素单抗新药新替妥（斯泰度塔单抗注射液）、国内第一款Ⅰ类新药CAR-T产品 药明巨诺倍诺达（瑞基奥仑赛注射液），以及恒润达生CAR-T产品恒凯莱（雷尼基奥仑赛注射液）的上市。

结语

艾普拜生物将基于玄武数字PCR平台，帮助CAR-T企业建立贯穿工艺开发、方法验证、注册申报、产品放行和临床随访的标准化检测方案，让每一批细胞药物的安全性都更加清晰、可控、可追溯。