在基因治疗从实验室走向临床和产业化的过程中，每一个病毒基因组的精准计数，都关系着产品质量、给药剂量与患者安全。艾普拜基于玄武Aegaeon数字PCR平台，推出rAAV基因组滴度与完整性检测方案，以绝对定量、双靶标分析和自动化，为AAV药物研发及质量控制提供更可靠的数据支持。

AAV滴度：不只是一个浓度数字

重组腺相关病毒（rAAV）是体内基因治疗的重要递送载体。其基因组滴度（VG）直接关系到生产收率、制剂规格、批次放行和临床给药剂量。

滴度低估，可能导致实际给药量偏高，增加免疫反应等潜在风险；滴度高估，则可能造成有效剂量不足，影响治疗效果。同时，AAV生产过程中还可能产生空壳、部分包装、基因组片段化或错误包装等颗粒——“颗粒数量相同”并不等于“有效基因组数量相同”。

因此，稳定、准确、可追溯的VG定量，是连接生产工艺、批间一致性、稳定性研究和临床剂量控制的关键质量基础。

▲载体剂量与系统载体转染后效果之间的关系

dPCR为何更适合AAV？

监管要求正推动AAV定量走向更高的准确性与精密度。

2025年国家药监局药审中心发布的《重组腺相关病毒载体类体内基因治疗产品申报上市药学共性问题与技术要求》进一步明确：“d(d)PCR方法相比qPCR方法是对基因拷贝数的绝对定量，不依赖标准品和标准曲线，具有较好的精密度和准确度”，并“鼓励优先采用精密度和准 确度较高的检测方法用于产品基因组滴度检测”。

相较qPCR，dPCR的核心价值体现在：

▎绝对定量更可靠：标准物质的DNA结构可能不同于真实的AAV基因组结构，因此存在扩增效率差异，而dPCR无需标准曲线，降低了扩增效率差异因素对高滴度AAV定量的影响。

▎复杂样本适应性更强：反应分区可降低样本基质和PCR抑制物对整体定量结果的干扰，适配从粗制收获液到成品制剂的不同样本。

▎多重定量更准确：相比依赖Ct值和扩增效率的qPCR多重体系，dPCR可在独立分区中同步计数GOI、ITR等靶标，降低靶标间扩增竞争造成的偏差，更准确地比较不同位点的拷贝数。

艾普拜数字PCR AAV滴度定量方案

艾普拜基于玄武数字PCR平台打造rAAV基因组滴度与完整性一体化检测方案，通过GOI与ITR双靶标同步定量，在一次反应中实现双维度质量评价。该方案搭配AutoRuby自动加样系统，减少手动操作，提升检测精密度，为rAAV工艺开发、质量研究、产品放行及方法学验证提供高效、稳定、可靠的检测支持。

1.双靶标设计，一次检测同时完成定量和完整度评价，提升效率

GOI检测浓度用于计算VG；通过分析GOI与ITR双阳性分区的linkage信息，可进一步评价两个靶标是否位于同一基因组分子，实现基因组滴度与完整性同步分析。

该方案经两组真实样本平行测试，AAV基因组完整度结果分别为77.62%和77.22%，CV均＜2.5%（分别为1.44%和2.30%）。

2.AutoRuby自动加样让自动化真正转化为数据质量

该方案搭配AutoRuby自动加样系统，可将96孔板或8联排PCR管中的反应液自动加载至Ruby芯片，5~10分钟即可完成96个样本的加样，缩短移液时间的同时，降低了人工操作带来的波动。

▎AutoRuby加样CV：0.90%～1.26%

▎手工加样CV：3.34%～4.20%

▎精密度水平：控制在10%以内，自动化加样使精密度提升3~4倍

 结语 

数字PCR的绝对定量能力和更优的检测精密度，正成为AAV质量研究的重要技术支撑。

艾普拜将继续依托玄武数字PCR平台，完善AAV基因组滴度、完整性及相关质量属性检测方案，以更精准的数据、更稳定的流程和更高效的工具，服务基因与细胞治疗药物研发。