文献标题：
• 父代低蛋白饮食以组织特异性方式扰乱小鼠跨代代谢稳态
• Paternal low protein diet perturbs inter-generational metabolic homeostasis in a tissue-specific manner in mice
现有研究大多聚焦母体营养对子代代谢的编程效应，父代饮食调控子代代谢稳态的分子、组织特异性机制尚不清晰。 
以 C57BL/6 雄性小鼠为对象，分别饲喂等热量正常蛋白日粮（18% 蛋白）与低蛋白日粮（9% 蛋白）至少 8 周；结合人工授精与结扎雄鼠交配实验，拆分精子与精浆来源，构建四组子代：
 
• NN：NPD 精子 + NPD 精浆（空白对照）
• LL：LPD 精子 + LPD 精浆
• NL：NPD 精子 + LPD 精浆
• LN：LPD 精子 + NPD 精浆
 
子代检测维度：体重 / 脏器重、血清 / 肝脏 / 性腺脂肪脂质组、肝脏转录组、粪便肠道微生物组、肝脏氧化炎症标志物。

肠道菌群与脂质代谢轴存在紧密关联，为验证肠道菌群是否介导父代饮食的跨代代谢编程，排除混杂变量，完善多组学证据链，提升结论严谨性，该研究采用脂质组 + 转录组 + 肠道微生物组多组学联合分析。  
肠道微生物组研究，对样本进行扩增 16S rRNA 基因 V3-V4 区，V3-V4 区约 170 bp，再加上引物、测序接头、索引标签，扩增后总的长度约440-470bp。在整个PCR扩增过程中，由于样本的复杂性，往往存在很多二聚体、游离接头、非特性扩增片段，进而影响测序质量，通过Sage Science公司的Blue Pippin 全自动DNA片段筛选系统搭配 1.5% 预制胶盒，对混合文库进行片段分选，精准筛选回收V3-V4 区文库，彻底去除引物/接头二聚体即各种非特异扩增片段，制备高质量NGS文库。随后，Illumina MiSeq测序仪进行 300 bp 双端测序，结果依托 Greengenes 13.8 数据库完成物种分类注释，开展肠道微生物组分析。

相比磁珠分选、人工琼脂糖切胶回收Blue Pippin 全自动DNA片段筛选系统的优势：
（1）分选范围更窄、片段筛选精度更高；
（2）全自动化运行，多批次样本间偏差小，消除人工操作误差；
（3）一次性预制胶无交叉污染，适配多组动物粪便微生物样本平行建库需求。
只要精子或精浆任一来源自低蛋白饮食，都会引起子代小鼠出现体重升高、脂质代谢紊乱。成年后该表型进一步加重，同时伴随肝脏代谢、炎症通路基因表达异常。父代低蛋白饮食效应可跨两代稳定遗传，即父代不良饮食的代谢编程效应可通过雄性谱系传递至孙代。  
• 全自动回收：采用双通道电泳回收专利技术，回收过程全自动运行；
• 精准回收：精确度高达93-99%，远高于手工切胶和DNA片段分选磁珠的方法
• 微量回收：低起始量，低至ng级，控制时间回收，不直接检测样品
• 高回收率：50-80%的高回收得率
• 省时间：5分钟的手工操作时间，无需额外制胶和切胶
• 全自动完成DNA片段分选, 软件中自由选择需要筛选的片段范围，免去了切胶纯化的繁琐步骤，比核酸片段筛选磁珠更加精准可控；
• 用于DNA常规分子生物学，精准彻底的去除PCR引物二聚体、非特异性片段等，去除酶切产物中非目标DNA条带；
• 用于小片段DNA筛选回收（DNA Size Selection），如小RNA/small RNA文库回收、cfDNA／ctDNA循环血游离DNA／循环血肿瘤DNA测序文库、ddRAD-SEQ双酶切简化基因组测序文库、16S文库微生物测序文库回收等、ChIP-seq文库、MeDIP-seq / hMeDIP-seq甲基化DNA免疫沉淀片段测序文库、ATAC-seq转座酶可及染色质高通量测序文库、遗传病 panel 扩增子文库等各种复杂样本的处理，提高测序数据质量；
• 用于大片段DNA（几kb、几十kb甚至几百kb）精准回收，如Pacbio HiFi文库构建、纳米孔测序建库、超长测序（Ultra-Long Sequencing）文库构建等，精准彻底去除小片段DNA，提高测序质量，降低测序成本；
• 低起始量样品的精准浓缩回收：血浆/血清cfDNA/ctDNA，微量细胞/单细胞，空气/冰川/岩石样本，低丰度病原体等；
• 降解样本的精准浓缩回收：FFPE（石蜡切片）、古DNA、腐烂样本、RNA样本等；
• 背景极高的复杂样品的精准筛选回收：废水、土壤、腐殖质、粪便、肠道内容物、痰液，脓液、临床拭子、血液、脑脊液、共生微生物、食品微生物等

参数	详情
分离范围	100 bp–基因组DNA
单孔最大上样量	10μg
电场模式	直流高压 / 低压、脉冲场交变电场
回收模式	窄范围回收、宽范围回收、High Pass大片段回收、Range+T回收
回收方式	自动化回收
最优准确率	设定值 ±2%（501-600bp）
最佳重复性	99%（501-600bp）
大片段准确率	30-40kb范围＞90%

环亚生物科技（APG BIO） 是美国 Sage Science 公司 DNA 片段回收系列产品在中国区的独家代理商。我们致力于为国内二代及三代测序用户，提供从样品前处理到质控的全流程整体解决方案。
我们的产品线覆盖核酸与样本制备全流程，核心产品包括： 核酸处理与质控类：全自动DNA片段分选回收仪（Sage Science系列）、核酸片段分析仪、脉冲场电泳仪；
自动化与定量类：全自动建库仪、荧光计、超微量分光光度计。