转化生长因子‑β（Transforming Growth Factor‑β，TGF‑β）是一类功能极为丰富的多效细胞因子家族，广泛参与细胞增殖、分化、凋亡、免疫稳态调控、组织纤维化、肿瘤发生发展等众多生理与病理进程。在肿瘤微环境、免疫抑制、器官纤维化、神经退行性疾病研究领域，TGF‑β1、TGF‑β2、TGF‑β3 是备受关注的核心靶标分子。但是 TGF‑β 独特的潜伏储存形式，给蛋白定量检测带来特殊样本前处理难题，样本酸化活化步骤是否规范，直接决定 ELISA、Luminex 多因子检测结果的真实性。本文从 TGF‑β 家族分子分类、信号通路机制、样本前处理原理、实操要点、检测服务方案展开系统阐述。

2、BMP/GDF 亚家族：序列多样性更高，主要调控细胞促分化、胚胎发育，主导不同谱系细胞命运决定，参与骨骼发育、组织修复再生过程。 

TGF‑β 三个亚型虽然同源性高，但组织表达分布、病理贡献不完全一致。TGF‑β1 在免疫、肿瘤相关研究中最为常见；TGF‑β2 多见于眼部、神经相关研究；TGF‑β3 参与组织修复，在创面愈合研究中应用较多，科研中常常需要同时对三种亚型开展并行定量检测。

下游信号分为经典 Smad 通路与非经典通路两大分支：
1、经典 Smad 通路：依赖 Smad2/3 入核完成转录调控。信号响应速度偏慢，但信号持续性强，主要介导长期细胞表型重塑，例如诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞转化、肿瘤细胞上皮间质转化。
2、非经典 TGF‑β 信号通路：不依赖 Smad 分子，激活 MAPK、PI3K 等信号轴。信号响应快速，主要调控细胞应激反应、短期细胞增殖应答。

两种通路协同作用，共同介导 TGF‑β 复杂的双向生物学效应，在不同细胞类型、不同微环境条件下，既可以表现出抑癌作用，也能够发挥促肿瘤进展功能。

1、TGF‑β 合成分泌之后，大多以无活性潜伏复合物（L‑TGF‑β）形式存在。TGF‑β 前体经过酶切加工，成熟的 TGF‑β 多肽和前结构域 LAP 以非共价键结合；还可以进一步结合 LTBP 形成大分子储存复合物，也可以锚定在细胞表面 GARP/LRRC33 分子上，以潜伏形式稳定留存于体液、组织当中。

2、生理条件下，需要依靠整合素、蛋白酶等介导构象改变，潜伏复合物解离，才能够释放出具备生物学活性的游离 TGF‑β。

3、ELISA、Luminex 多因子检测，只能识别游离成熟 TGF‑β，无法检测潜伏结合态的 TGF‑β。酸化处理可以破坏潜伏复合物内部非共价相互作用，在体外人工解离，释放总 TGF‑β，实现样本总 TGF‑β 的准确定量。如果省略酸化活化步骤，得到的仅仅是样本中少量已经活化的 TGF‑β，会严重低估样本真实含量，导致实验数据失真。
注意：酸化操作是检测总 TGF‑β 的必需前处理；若实验目的是专门检测样本内天然活化 TGF‑β，则不可进行酸化。绝大多数科研课题报道 TGF‑β 表达水平，检测的是样本总 TGF‑β，必须执行酸化。

   
酸化操作关键细节：
1、酸、碱加入顺序不可颠倒；孵育时间严格控制；中和完成之后尽快上机检测，避免解离后的 TGF‑β 再次发生吸附、重新结合潜伏蛋白；
2、酸化会带来样本稀释效应，后期数据分析需要换算回原始样本浓度；
3、Luminex 技术如果同时检测 TGF‑β 和其他细胞因子，酸化条件会破坏 IL‑6、TNF‑α 等多数细胞因子，因此 TGF‑β 一般建议单独样本管酸化处理，不与普通炎症因子共用同一份处理后样本。 

平台也可根据科研需求定制组合检测方案。

原文点击：TGF‑β家族分子生物学机制与样本前处理检测关键技术