检测Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抗体常用主流方法
2026-09-09 来源:本站 点击次数:16
检测Caspase激活的脱氧核糖核酸酶（CAD）抗体，常用的主流方法和操作要点如下：
🧫 免疫印迹法（WB，最常用）
提取细胞或组织总蛋白，经SDS-PAGE电泳分离后转印至NC膜，用CAD特异性抗体作为一抗，4℃孵育过夜，再加入对应的HRP标记二抗孵育，通过化学发光显影，可直接检测样本中CAD抗体的表达与结合情况，同时区分CAD的前体和激活态分子量差异。
🔬 免疫荧光法
将细胞接种于爬片上，经凋亡诱导处理后固定、透化，用CAD抗体进行一抗孵育，再用荧光标记二抗染色，可在共聚焦显微镜下观察CAD抗体的定位，追踪凋亡过程中CAD从胞质向细胞核转位的动态变化。
📊 酶联免疫吸附实验（ELISA）
采用ALONA亲和连接寡核苷酸核酸酶实验体系，将5'端标记地高辛、3'端标记生物素的DNA底物固定在链霉亲和素包被的酶标板上，加入待测CAD抗体反应后，用酶标抗地高辛抗体显色，可定量检测样本中具有核酸水解活性的抗CAD催化抗体，适合大样本量筛选。
🧬 联合TUNEL法验证功能
利用TUNEL技术检测CAD激活后切割产生的DNA 3'-羟基末端，同时用抗激活型Caspase-3抗体共标记，可区分凋亡过程中CAD介导的DNA片段化，排除坏死细胞中非CAD途径产生的3'-OH末端干扰，验证CAD抗体的功能活性。
🧫 免疫印迹法（WB，最常用）
提取细胞或组织总蛋白，经SDS-PAGE电泳分离后转印至NC膜，用CAD特异性抗体作为一抗，4℃孵育过夜，再加入对应的HRP标记二抗孵育，通过化学发光显影，可直接检测样本中CAD抗体的表达与结合情况，同时区分CAD的前体和激活态分子量差异。
🔬 免疫荧光法
将细胞接种于爬片上，经凋亡诱导处理后固定、透化，用CAD抗体进行一抗孵育，再用荧光标记二抗染色，可在共聚焦显微镜下观察CAD抗体的定位，追踪凋亡过程中CAD从胞质向细胞核转位的动态变化。
📊 酶联免疫吸附实验（ELISA）
采用ALONA亲和连接寡核苷酸核酸酶实验体系，将5'端标记地高辛、3'端标记生物素的DNA底物固定在链霉亲和素包被的酶标板上，加入待测CAD抗体反应后，用酶标抗地高辛抗体显色，可定量检测样本中具有核酸水解活性的抗CAD催化抗体，适合大样本量筛选。
🧬 联合TUNEL法验证功能
利用TUNEL技术检测CAD激活后切割产生的DNA 3'-羟基末端，同时用抗激活型Caspase-3抗体共标记，可区分凋亡过程中CAD介导的DNA片段化，排除坏死细胞中非CAD途径产生的3'-OH末端干扰，验证CAD抗体的功能活性。
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