GPR65人源化小鼠应用于质子感应受体靶点体内评价
2026-09-28 来源:南模生物 点击次数:32候选分子走到体内评价这一步时，GPR65 人源化小鼠是常被问到的一类工具。细胞外环境的酸碱度并不是一个恒定背景值。炎症灶、缺血组织与实体瘤内部，代谢产物堆积会让局部 pH 明显低于正常组织，而这种变化本身就是一种可被细胞读取的信号。GPR65（曾用名 TDAG8）正是负责读取这类信号的分子之一：它属于质子感应型 G 蛋白偶联受体，在细胞外质子浓度升高时构象发生改变并启动下游信号，在多种免疫细胞上均有分布。
近年来，这个受体在两条线上同时受到关注。一条是炎症方向，人群遗传学研究把GPR65 的常见变异与炎症性肠病的发病风险联系起来；另一条是肿瘤方向，实体瘤内部的酸性微环境被认为会通过该受体影响浸润免疫细胞的功能状态。两条线索都指向同一件事：GPR65 有望成为可干预的靶点。
问题随之而来。针对人源GPR65 开发的抗体或小分子，其识别位点与活性依赖人源受体的序列特征；而普通小鼠体内只有鼠源受体，两者在序列上并不相同，候选分子未必能在小鼠体内找到匹配的作用对象。要把体外筛出来的分子推进到动物水平评价，需要一个体内表达人源受体的模型。
品系构建
针对这一需求，研发人员利用同源重组，将小鼠Gpr65 基因进行人源化修饰，获得 hGPR65 小鼠。
图1：hGPR65小鼠脾与肺的RT-PCR转录本检测
图2：hGPR65小鼠肝肾GPR65的Western blot检测
图3：hGPR65小鼠肾肺GPR65的Western blot检测
验证数据
转录本水平验证。取野生型对照小鼠（6 周龄，雄性，n=2）与纯合 hGPR65 敲入小鼠（9 周龄，雌性，n=2）的脾与肺提取 RNA，反转录后以 mRNA 引物进行 PCR。鼠源引物对应的扩增片段为 846 bp，人源引物对应的扩增片段为 259 bp；后者仅在纯合敲入小鼠中检出，野生型对照小鼠中未检出（图1）。
蛋白水平验证（约37 kDa）。收集野生型对照小鼠（6 周龄，雄性）与纯合敲入小鼠（9 周龄，雌性）的肝、肾组织裂解物，采用可同时识别人源与小鼠 GPR65 的交叉反应抗体进行 Western blot 检测。两种基因型的肝与肾中均可检出 GPR65，特异条带位于约 37 kDa（图2）。
蛋白水平验证（70–100 kDa）。收集野生型对照小鼠与纯合敲入小鼠（均为8 周龄，雄性）的肾、肺、脾组织裂解物，采用可识别人源与小鼠 GPR65 胞外片段的交叉反应抗体进行 Western blot 检测。两种基因型的肾与肺中均可检出 GPR65，特异条带位于 70–100 kDa 之间，官网提示这一差异可能与不同的翻译后修饰有关（图3）。
需要说明的是，图2 与图3 使用的抗体对人源与小鼠 GPR65 均有反应，因此两种基因型都呈阳性属于预期结果，这两张图反映的是蛋白层面的可检出性与分子量特征，基因型之间的区分依据来自图1 的转录本检测。
应用方向
基于上述验证数据，hGPR65 小鼠可用于在体内水平考察靶向人源 GPR65 的候选分子，包括抗体与小分子的组织暴露、受体占据等评价环节；脾、肺、肝、肾等组织的检测流程已经建立，便于按研究方向选择取材部位。结合该受体在酸性微环境与免疫细胞中的分布特点，该品系也可为炎症性肠病、肿瘤免疫微环境等方向的机制研究提供一个表达人源受体的动物层面工具。 靶向人源GPR65 的候选分子，为什么要用人源化小鼠做体内评价？
GPR65 是质子感应型 G 蛋白偶联受体，针对人源序列开发的抗体或小分子，其识别位点依赖人源受体特征，而普通小鼠体内只有鼠源受体。hGPR65 小鼠（目录号 NM-HU-220504）经人源化修饰后体内表达人源受体，可作为 TDAG8 小鼠模型开展人源受体体内评价；官网已完成 RT-PCR 与 Western blot 验证，脾、肺、肝、肾等组织的检测流程已经建立。
hGPR65（目录号：NM-HU-220504）由南模生物研发。更多品系信息、完整验证数据与配套服务，欢迎访问南模生物官网（www.modelorg.com）查询，或联系我们获取技术资料。
关于南模生物
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