植物组织类样本DNA提取完整解决方案

​植物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基础操作。实施分子标记、基因图谱、基因指纹图谱、基因文库构建、遗传多态性分析、DNA重组、RAPD（随机引物多态性DNA）、RFLP（限制性酶多态性）、基因分离及遗传转化和鉴定等都以提取DNA为前提。

目前，对从植物组织中提取DNA方法的要求是：简便、有效、快捷以及经济。与动物组织相比，植物组织含有较多的多糖和其他次生代谢产物（酚、酯、萜、色素等），这给高质量的DNA提取带来较多的困难。尤其是多糖成分是影响DNA纯度最常见的问题。如何做到既去除这些污染物又能相对保持高的产量，并且能简捷有效地提纯，一直是植物生物技术研究者探索的问题。

01普通的植物

对于普通的植物（低酚、低酯、低糖等）如：水稻、白菜、苋菜、南瓜、黄瓜、西红柿、上海青、菠菜、笋瓜、冬瓜、莲藕、山药、竹笋等；我们可以选用普通植物DNA提取试剂盒（磁珠法）试剂（货号：K318）。

02多糖、多酚类植物

对于多糖、多酚类植物（香蕉、西瓜、苹果、梨等果肉，红薯、马铃薯等块茎，棉花、月季、枇杷、益母草、夏枯草等人参、曼陀罗、向天果、射干、桔梗、满山红、金鸡纳霜等药用植物）可以选用多酚植物DNA提取试剂盒（磁珠法）试剂（货号K319），针对类似的植物我们经过长期的优化，可以得到较好的实验结果。

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以叶片为例，叶片需先剪碎成小块，以便放入1.5ml离心管。最佳样本的长度应在1cm 以下。重量不超过250mg，推荐使用50mg，如果是植物种子粉末可以使用10mg-20mg粉末即可。

样本数量较少的情况下：可以使用手持式（宝予德）研磨仪，将植物的组织切碎后放入1.5ml 尖底离心管中，将研磨棒的头部碾压植物组织，打开研磨仪的开关，直至肉眼看到植物组织研磨成碎末。

样本数量较多的情况下：可以使用HF Extract组织研磨仪 可以同时处理2-192个样品（需配不同适配器）。将植物的组织切碎后放入2ml的研磨管中，加入钢珠或二氧化锆珠8-16颗（根据试剂情况灵活选择），按照如下方案编辑研磨程序：

对于茎部纤维化比较严重的组织或者根部样本，要配合液氮处理（将植物组织用剪刀剪切<0.5cm，放入研磨管中），使用配套的冷冻研磨套件（如下图），将研磨罐中灌入液氮冷冻植物样品，等液氮挥发后，快速拧好研磨罐放入研磨仪。执行程序：

提取过程：

1.打开研磨后的管子（预先6000rpm离心30sec防止管子上的碎片或碎末飞出，污染实验室），加入裂解液APL（需要预热）400-600 μl，放入水浴锅中孵育30 min-1 h。

2.孵育后，12000 rpm 离心3min，取上清100μl-200μl 上清（含淀粉多的样品容易糊化，可以增加离心时间至5-10min）

 

96孔预分装板

3.加入预分装96孔板中的第1、7列，然后放入核酸提取仪中（如下图），插好磁棒套。点击运行程序。

4.20min后，完成DNA的提取。转移5、11列中的DNA 至1.5ml离心管中，使用超微量分光度计（Mcro-Drop ）检测核酸浓度：

5.记录检测结果，进入下步扩增或将DNA保存至-20℃。