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用于筛选CRISPR/Cas9的基因敲除细胞系的DNA制备方法

2023-05-06     来源:本站     点击次数:1478

CRISPR/Cas9是原核生物的一种免疫应答机制,被用于识别和破坏外来的致病性DNA。科学家们运用CRISPR/Cas9原理在真核生物中进行基因组编辑,这项技术被进一步用于支持基础生物研究、开发生物技术产品以及治疗疾病。尽管这种技术非常高效,但其中某些步骤可能会很耗时,例如编辑和基因分型分析步骤之间的时间。一般情况下,在用CRISPR/Cas9系统对细胞进行转染后,为了评估编辑效率和筛选携带所需基因改变的克隆,细胞通常在96孔板中进行单独培养扩增,以便被用于基因分型,这个时间可能需要长达3-4周的时间。

MicroGEM公司的prepGEM通用DNA提取试剂盒(#PUN1000)提供了一种灵活的提取方法。它是一种依靠温度驱动的单管提取方法,不需要进行洗涤和离心步骤,可以在7分钟内从1至96个样本中提取DNA。

在本应用文章中,prepGEM Universal被用于从CRISPR介导的编辑后的单细胞克隆中提取DNA,以进行克隆的筛选, 提取是在转染10天后使用96孔板进行的。数据表明,prepGEM Universal很适合CRISPR筛选,并提供了一种快速和简单的方法来提取适合PCR和测序分析。

详见链接:

https://microgembio.com/m_resource/fast-and-simple-dna-preparation-for-the-screening-of-crispr-cas9-generated-knockout-cell-lines

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