二、HDAC抑制剂
当HDAC异常高表达时，许多抑癌基因被“沉默”，为肿瘤细胞生长提供了便利。HDAC抑制剂通过阻断HDAC的活性，恢复基因的乙酰化水平，重新激活这些被压制的基因，参与调控了很多细胞因子和生物标志物。

2、细胞因子&生物标志检测
（1）THUNDER TR-FRET方法

（2）OneStep ELISA细胞因子检测
OneStep ELISA开发标签抗体捕获技术，板底包被标签抗体，可高灵敏捕获双抗夹心复合物，搭配高特异性重组单抗，一步即可在溶液中形成抗体-分析物夹心复合物。可轻松准确定量蛋白。仅需1h，即可定量细胞因子。

3、信号通路磷酸化蛋白检测
p-Akt、f NF-B也是由HDAC抑制剂一致调控的细胞因子，一些HDAC抑制剂会降低p-Akt和f NF-B水平。使用均相免洗免疫检测技术，如TR-FRET，在大分子数据库中快速筛选潜在候选分子。

（1）THUNDER TR-FRET 磷酸化蛋白检测
THUNDER TR-FRET时间分辨荧光共振能量转移，检测技术灵敏度高，特异性好，重复性好，操作简单，仅需1~4h。一种基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF, Time-Resolved Fluorescence）的技术，采用夹心法，检测胞内AKT磷酸化水平和总AKT水平。

用IGF-1处理MCF7细胞（60000个细胞/孔）与IGF-1在室温下孵育10分钟。数据显示，不同酶标仪对信号的影响。用LY294002、Wortmannin和S961处理MCF7细胞（60000个/孔），在室温下孵育30分钟，然后用1µM胰岛素刺激细胞，在室温下孵育10分钟。数据显示，LY294002和Wortmannin可以抑制AKT蛋白S473位点的磷酸化，而S961则无抑制效果。

（2）WB方法检测
以Phospho-NF-κB为例
Phospho-NF-κB p65 (Ser536) 抗体采用1/1000稀释， HELA细胞100 ng/ml Calyculin A处理30分钟， TNF-α 20 ng/ml 处理5分钟，Goat Anti-rabbit IgG, (H+L), HRP 采用1/10000稀释，上样检测，数据展示如下。

4、杀伤功能检测——GRANZYME B
HDAC抑制剂可以使Granzyme B增加。
THUNDER Biomarker检测是基于双抗体夹心法，标记荧光供体和受体的Granzyme B抗体Eu-Ab1和FR-Ab2，分别与细胞上清中Granzyme B 结合，产生能量共振转移FRET（615nm），进而产生665nm荧光信号，荧光信号强度与Granzyme B浓度成正比。全程仅需2h，免洗，可高通量。检测灵敏度高，上限宽。

相关产品推荐