同一类的Ig，根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数量及位置的不同，又分为不同的亚类（subclass），如人IgG可分为四个亚类，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。轻链可分为两种，分别为kappa（κ）链和lambda（λ）链。据此，可将Ig分为两型（type），即κ型和λ型。

图1 IgG抗体结构示意图

随着抗体药物技术的不断演进，抗体类型与分子结构日趋多样化。
从传统单抗（mAb）到双抗（BsAb）、抗体偶联药物（ADC）、抗体寡核苷酸偶联体（AOC）及多价抗体等新分子形式层出不穷。
这些分子在 Fc 结构、亲和力、糖基化修饰及热稳定性 等方面存在显著差异，
导致下游纯化环节面临新的挑战：
• Protein A 结合差异增大：部分抗体或片段无法稳定结合；
• 分子稳定性更敏感：低 pH 洗脱易引发构象变化或聚集；
• 杂质性质更接近：片段、聚集体及错配体在电荷、疏水性上与主峰相似，分离难度显著增加；
• 工艺窗口更窄：对配基选择、洗脱条件及清洗策略提出更高要求。

因此，开发兼顾高选择性、温和洗脱条件的亲和层析工艺，成为抗体纯化工艺优化的关键方向。

核心原理：利用抗体与配基的高亲和结合 → 非目标杂质洗脱 → 调整 pH 实现可逆洗脱。

不同抗体类型（IgG、IgM、IgA、双抗、抗体片段等）需根据结合结构、亚型及分子特性匹配合适配基，才能获得最佳纯度与回收率。

下图展示了抗体亲和填料选择流程图（图2），可帮助研发人员在早期开发阶段快速判断适用填料类型与推荐产品：

图2 抗体亲和填料选择流程图

2.动态结合载量（DBC）与分离平衡
DBC（Dynamic Binding Capacity） 反映填料在特定流速与保留时间下的结合能力，是评价抗体捕获效率的重要指标。
• DBC 高 → 捕获通量提升、处理能力强，但可能导致分辨率下降或杂质共洗脱；
• DBC 低 → 分离效果好但通量不足。
工艺开发中需在载量、流速、收率与纯度之间找到平衡点，综合考虑分离效率与工艺的经济性。

3.可放大性与压力–流速性能
可放大性是衡量填料从实验室到生产规模平稳过渡能力的关键。
部分填料在小试阶段表现良好，但放大后因机械强度不足或柱床压缩，出现运行压力上升、流速受限、柱床塌陷等问题，迫使客户在中后期调整工艺或降低生产效率。
建议在早期开发阶段就验证填料的压力–流速表现与可用线速度窗口，确保放大后依然满足通量与运行压力要求。

4.长期耐碱稳定性
亲和层析需经受反复NaOH在位清洗（CIP），耐碱性能直接决定填料使用寿命与生产成本。
高耐碱性填料可承受 0.5–1.0 M NaOH 清洗数百循环而保持载量与性能稳定，是实现长期稳定生产的关键。

5.批间一致性与供应稳定性
在工业化阶段，层析填料不仅是纯化工艺的关键耗材，更是保证生产稳定、可控的重要组成部分。
填料的质量批间一致性和稳定供应直接影响工艺的稳健运行与用户终产品质量的一致性。
• 批间一致性：考察不同批次填料在关键性能等方面保持稳定，以确保纯化工艺在不同生产周期中具备良好的重复性和产品质量一致性。若批次差异过大，可能导致目标蛋白回收率波动、杂质谱变化或放大验证失败。

• 供应稳定性：考察方向应不仅包含供应商持续、可靠的供货能力，还应包括供应商在质量管理体系、生产产能、工艺一致性验证及技术支持等方面的长期稳定性。对于商业化生产企业而言，供应链的稳定与可持续性是维持生产稳定运行和风险可控的前提条件。

在亲和填料筛选阶段，应将产品的批间一致性与供应商的长期稳定供货能力纳入综合考量。

这不仅关系到物料性能的可重复性，也决定了工艺的稳健性和最终产品的质量稳定性。

实验条件：
层析柱：EzScreen 4.4 mL（Bed height = 10 cm）
样品：mAb 原样，样品浓度6.8 mg/mL
Binding buffer: 20mM Tris-HCl, 0.15M NaCl, pH 7.2

Wash buffer 1: 20mM NaAc，1 M NaCl, pH 7.2

Wash buffer 2: 20mM Tris-HCl, pH 7.2

Elution buffer 1: 50mM NaAc-HAc, pH 4.0

Elution buffer 2: 50mM NaAc-HAc, pH 3.5

图3. Novo-A Diamond单抗纯化层析及电泳图谱。

结果表明：Novo-A Diamond 在温和洗脱条件下仍具高捕获能力，适合对低pH条件敏感抗体的纯化。

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