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小鼠开颅手术流程及实操全攻略

2025-11-11     来源:本站     点击次数:142

在神经科学研究中，稳定、可靠的动物模型是探索生命机制与验证治疗策略的基石。小鼠开颅手术作为构建多种脑科学研究模型的核心技术，其操作的规范性与精准性至关重要。一次成功的手术，不仅能最大限度减轻动物损伤，更是保障后续实验数据准确性与可重复性的关键。

熟练掌握开颅手术，离不开对脑部解剖结构的深入理解与精细操作技术的反复锤炼。在实际操作中，许多研究者常面临以下典型问题：
✅ 如何安全磨除颅骨，确保脑组织完整无损？
✅ 在固定颅窗玻片时，如何平衡固定强度与成像视野的完整性？
✅ 术中无菌操作与术后动物护理，有哪些必须重视的细节？

本文将围绕经典的小鼠开颅手术流程展开，通过清晰的步骤演示与关键要点解析，系统梳理该技术的核心方法。作为“ 双光子荧光成像小鼠制备手术”的首篇，本文旨在帮助读者夯实手术基础。未来我们还将陆续详解GRIN Lens植入、脊髓开窗、双光子与EEG电极埋植结合等更多精细手术操作，陪伴您在科研道路上不断精进技术。

温馨提示：考虑到您的观看感受，我们对部分手术画面进行了柔和处理，请放心观看。

PART.01 术前准备
  1. 手术器械：两把精细镊、一把双头微型刮铲、一把弹簧剪。
  2. 实验耗材：准备实验所需耗材和生理盐水（1%头孢曲松钠）。
  3. 器械消毒：术中所有使用的器械或植入物使用前需消毒处理，可以用75%乙醇消毒，有条件的可以定期高压灭菌。
  4. 手术台消毒：手术台使用前应用75%乙醇擦拭消毒，手术台应垫无菌布、干净的吸收垫或毛巾，每次手术结束后须更换这些材料。
   

PART.02 麻醉、固定
  1. 将小鼠放入麻醉剂仓室内进行诱导麻醉，气体流量与麻醉刻度根据实验室的气麻机设置。当小鼠出现明显呼吸减慢、四肢放松，则表明小鼠已进入麻醉状态。
  2. 将麻醉后的小鼠固定于脑立体定位仪上，并维持麻醉，在手术过程中时刻注意观察小鼠呼吸。
   

PART.03 脱毛
  1. 将红霉素眼膏均匀涂抹于小鼠眼部，用量应完全覆盖小鼠眼部，使眼部不暴露在外。
  2. 使用医用棉签蘸取脱毛膏，逆着毛发生长的方向均匀涂抹于毛发根部，约2min后用棉签擦拭脱去头部毛发。
  3. 使用医用棉签蘸取生理盐水，将小鼠头部残留的脱毛膏清洗干净。
  4. 使用碘伏擦拭清洁脱完毛的皮肤。
   

PART.04 暴露并清理颅骨
  1. 使用弹簧剪剪去头皮。 
  2. 将所暴露颅骨上的黏膜和两处肌肉连接处多余脂肪全部剥去。
  3. 使用微型双头刮铲刮除颅骨表面残余黏膜、结缔组织等。 
  4. 持洗耳球，将颅骨表面吹至完全干燥。 
   

PART.05 开颅
  1. 以病毒注射孔或定位位点为圆心，持精细镊将合适规格的圆形玻片放置在颅骨表面。
  2. 将颅骨钻速度调至低档，沿玻片大小打磨一圈后，使用洗耳球轻轻吹去碎屑，重复此操作直至打磨范围完全符合玻片大小，再调整转速至中高档，继续打磨。 
  3. 待打磨颅骨出现裂缝时，将颅骨钻转速调至低档，继续打磨，重复操作直至整个颅窗完全断裂。 
  4. 持精细镊，将颅骨片慢慢的揭开。

PART.06 挑碎骨屑
使用精细镊从颅窗侧面下针，轻轻将周围碎骨片挑出，重复此操作直至颅窗周围完全无碎片。

PART.07 安装玻片
  1. 使用精细镊将清洗后的玻片夹持轻轻放置在暴露的脑组织上；用镊子轻轻按压玻片，使玻片紧紧贴合打磨的颅面并嵌入颅骨下方；在体式显微镜下查看玻片下是否有气泡，若有气泡，将玻片揭开后滴加生理盐水，重复此操作直到无气泡止。
  2. 使用吸潮纸尖吸去渗出到玻片外的多余的液体，使用洗耳球轻轻吹干颅骨表面，以从外向内的顺序，用小毛刷蘸取少量生物组织胶水，涂抹在边缘皮肤、整个颅骨和颅窗边缘。
  3. 等待生物组织胶水干透后，用牙科涂药棒蘸取406胶水，涂抹范围同上，等待406胶水干燥。
  4. 使用吸潮纸尖蘸取502与牙科水泥的混合物，少量多次涂抹在颅窗的边缘，整个操作过程当中要切忌让胶水流至玻片中央。

PART.08 安装头件
  1. 使用 502 胶水溶解混匀牙科水泥，对暴露的颅骨进行一层薄薄的均匀的覆盖，完全封闭暴露的颅骨，并在牙科水泥未干时安装头件。
  2. 用牙科水泥充分填补与头件之间的缝隙或连接薄弱处，加强头件稳固性。 
  3. 等待牙科水泥干透后，把小鼠放入保温箱，等待小鼠苏醒。 
   

PART.09 术后护理
  1. 为动物提供良好的生存条件，建议单笼饲养，并将饲料撒在笼内，避免动物摄食或打架时摩擦碰撞头件，导致视野偏移或头件掉落。
  2. 术后1-7天，对动物腹腔注射头孢曲松钠溶液，每日1次。

在探索神经科学的道路上，我们愿与您同行。若您在实验中面临任何挑战，超维景专业团队始终是您可靠的后盾，随时为您提供支持。
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