简介
为了满足用户对更快、更精简的 DNA 文库制备实验流程的需求，同时需要针对各种样本类型都能制备出高质量文库，New England Biolabs开发了NEBNext UltraExpress™DNA文库制备试剂盒，该试剂盒对不同起始量的DNA 样本都共用一个相同简单的流程，无论是机械打断或是酶切打断的DNA均适用。与以前的试剂盒相比，该试剂盒工作流程使用预混试剂，减少了反应时间和纯化步骤，得益于改进的化学组分，针对不同的起始量的DNA，2小时内即可制备出高产量、高质量文库。配合自动化的移液工作站，这个新的试剂盒能够为NGS建库提供一套非常通用、高通量、高质量的 DNA样本制备流程。

哈佛医学院的生物聚合物基因组学核心设施（BPF）研究人员使用SPT Labtech的firefly®液体处理平台，成功自动化实现多功能NEBNext UltraExpress DNA文库准备试剂盒从不同投入量的DNA制备出高质量的NGS文库。通用的、简化的NEBNext UltraExpress工作流程与用户友好的firefly一起创建了用于生成用于Illumina DNA测序的NGS库方法之一。
 

自动化基因组学液体处理之firefly
firefly是专门为简化NGS文库制备而设计的，它集成了多种液体处理能力。

方法
NEBNext UltraExpress文库准备试剂盒
在96孔PCR板（Biorad Hard-Shell®plate）上，使用firefly完成所有的分液、吸液和混匀步骤，以执行基于磁珠的DNA纯化。

• DNA纯化珠（Ampure XP, Beckman Coulter）、乙醇和洗脱缓冲液（0.1×TE）以及酶混合物使用非接触式分液头进行分液。

• DNA样品和Index引物转移、所有混匀步骤和所有上清转移至waste均使用移液头进行。

• 96孔板磁铁（MagnumFLX, Alpaqua）用于所有磁珠分离步骤。

NEBNext UltraExpress DNA Library

Prep with FS:

• 所有12列11.8ng illumina PhiX DNA，不需要打断因为试剂盒包含酶切打断。

NEBNext UltraExpress DNA Library

已经打断DNA:

• 74.7 ng/µL（来自Qubit的浓度）人gDNA (promega)，使用Covaris M220打断至200bp。在TapeStation D5000上运行打断文库以确认达到所需的大小。1:20稀释，然后Qubit QC得到浓度6.96 ng/µL。最终每孔输入104.4 ng打断的人gDNA。包括2个孔的NTC（DNase/ rase -free water）​

​结果

结论
在这项工作中，我们展示了NEBNext UltraExpress DNA文库准备工作流程，成功地在firefly自动化上使用和不使用酶切片段化系统，并在96孔板中证明样本片段大小分布的均一性。结合易用的firefly和NEBNext UltraExpress DNA文库准备试剂盒操作简单，使DNA测序文库的构建比以往任何时候都更容易。快速的NEBNext UltraExpress DNA文库准备工作流程，允许DNA在短短几个小时内从初始样本到可读文库的快速和有效的自动化；与更多劳动密集型试剂盒相比，通过手动或自动执行需要更长的时间，从而节省宝贵的时间和资源。firefly是同类产品中最紧凑的液体处理器之一，能够以最小的工作台空间要求实现简单NGS文库制备的自动化。这与它的易用性相结合，使面临规模和人员限制的实验室能够满足其NGS库制备的需求。