提起基因编辑小鼠，不少实验室的第一反应都是"头大"。好不容易拿到几只模型鼠，却发现数量远远不够，扩繁成了燃眉之急。然而，合笼N周，迟迟不见雌鼠怀孕；好不容易盼到仔鼠呱呱坠地，母鼠却突然上演全鼠宴……

小鼠久配不孕究竟卡在哪一环？今天小编就来一次"原因+对策"打包拆解，把小鼠饲养繁育路上的坑一次填平。

小鼠无法怀孕的原因与解决方案
01 种鼠因素
· 年龄与健康
性成熟不足：雄鼠年龄太小（通常需要6~8周龄以上才性成熟，但最佳繁殖期在2~6月龄）。
年龄过大/精子质量下降：老年雄鼠（通常8~12个月以上）精子数量、活力、畸形率可能不理想。

· 生殖系统异常
雌鼠阴道隔或阴道闭锁、雄鼠生殖器损伤或异常等导致无法交配。

图1. 小鼠阴道图示对比

图示：左图为正常小鼠阴道；右图为不正常小鼠阴道。箭头所示为阴道隔，该纵向组织可能会导致妨碍小鼠交配，并且在动物生产时会导致难产。

图2. 小鼠包皮嵌顿图示

图示：左图为包皮嵌顿，是一种阴茎卡在包皮外面的情况；右图为包皮过长，阴茎包裹在包皮中，以上雄鼠均无法交配。

解决方案
淘汰老龄或异常种鼠，选择6~8周龄、体态健康（被毛光泽、四肢有力等）、生殖器官正常的年轻优质种鼠。

02 环境因素
· 噪音与光照：高强度噪音或夜晚亮光干扰小鼠昼夜节律，交配意愿降低。
· 饲养条件：氨浓度过高（垫料未及时更换）、温度湿度不适宜、缺乏筑巢材料等。在大小鼠饲养管理中，环境控制是影响繁殖表现的关键因素之一。

解决方案
（1）保持安静、暗环境，提供棉絮或软木絮等筑巢材料。
（2）定期更换垫料，控制温度（20~26℃）和湿度（40~70%）。

03 营养与感染
· 营养失衡：脂类或蛋白质摄入异常、缺乏生育酚（维生素E）。
· 病原体感染：如肺支原体感染可导致不孕或胚胎吸收。

解决方案
（1）补充瓜子、坚果等生育酚来源，调整均衡饲料。
（2）进行生物净化或使用SPF级小鼠，避免病原体干扰。

04 遗传与基因型问题
· 基因编辑影响生殖：编辑操作影响了生殖器官发育、配子形成、性激素合成或交配行为的基因，导致不育或生育力严重下降。
· 胚胎致死性：某些基因型（如纯合敲除）可能导致小鼠胚胎期死亡，无法获得纯合子后代。
· 纯合子不育：纯合子存活但无法繁殖（如生殖缺陷、体质虚弱），只能通过杂合子交配维持品系。
· 基因表达干扰：Cre工具鼠的漏表达可能影响生殖细胞。

解决方案
（1）通过杂合子交配验证胚胎存活能力，或改用条件性敲除策略。
（2）采用体外受精（IVF）或胚胎移植（ET）技术绕过自然交配障碍。
了解了原因之后，该如何正确进行交配？

01 推荐配种方式
· 配种比例：推荐1雄鼠配2雌鼠（1:2），避免饲养密度过高导致环境恶化。
· 合笼顺序：先放入雄鼠适应至少1小时，再加入雌鼠，减少攻击行为。
· 基因型配对：首建鼠（如转基因）需与野生型小鼠交配，避免首建鼠之间互配。条件性敲除小鼠（如Flox小鼠）需与Cre工具鼠交配以实现组织特异性敲除。

02 推荐配种时间
· 性成熟期：小鼠通常在6~8周龄配种，最迟不超过3月龄。不能太早（母鼠还没发育好），也不能太晚（繁殖性能会下降）。需要注意的是，小鼠的繁育能力具有品系依赖性；C57BL/6等近交系模型繁育性能一般低于封闭群小鼠。

发情期：雌鼠可优先挑选发情雌鼠进行交配。
· 血配（产后交配）：雌鼠产后12~24小时内发情，可利用该特征进行再次交配，提高受孕率。
· 昼夜节律：严格维持12小时光照/12小时黑暗的周期，确保至少10小时连续黑暗以促进发情。

若自然配种困难，可借助快速扩繁技术
· 体外受精（IVF） 利用少量雄鼠精子与卵母细胞体外结合，移植至假孕母鼠体内，短期内获得大量同周龄子代。
· 胚胎移植（ET） 将基因编辑胚胎移植至健康受体母鼠，解决母鼠带哺能力差或感染问题。· 精子冻存与复苏 保存珍贵品系精子，避免断代风险。

图3. 南模生物饲养繁育冻存保种附属生物净化鉴定服务

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上海南方模式生物科技股份有限公司（Shanghai Model Organisms Center, Inc.，简称"南模生物"），成立于2000年9月，是一家上交所科创板上市高科技生物公司（股票代码：688265），始终以编辑基因、解码生命为己任，专注于模式生物领域，打造了以基因修饰动物模型研发为核心，涵盖多物种模型构建、饲养繁育、表型分析、药物临床前评价等多个技术平台，致力于为全球高校、科研院所、制药企业等客户提供全方位、一体化的基因修饰动物模型产品解决方案。

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