LF200倒置荧光显微镜在AOPI活死细胞双色荧光检测中的规例
2026-08-01 来源:本站 点击次数:97| 技术文档 / 实验室标准规程 / 细胞分析系统 莱特 LF200 倒置荧光显微镜在 AO/PI 活/死细胞双色荧光检测中的规例 |
| 一、 方案背景与检测原理概述 |
AO/PI 双色荧光染色法是评估原代细胞活力的重要手段。AO 标记活细胞胞质与胞核（绿光），PI 标记质膜破损死细胞（红光）。
| 荧光探针 | 透膜机制 | 作用靶点与反应 | 激发/发射波长 |
| 吖啶橙 (AO) (绿色荧光) |
膜透过型 (脂溶性) |
自由穿透完整活/死细胞膜，与双链 DNA 嵌合发出强绿色荧光 | Ex: 488 nm / Em: 525 nm (匹配 FITC/GFP 绿光通道) |
| 碘化丙啶 (PI) (红色荧光) |
非膜透过型 (仅透过受损膜) |
仅在质膜受损时穿入胞内，与双链 DNA 嵌合发出红色荧光 | Ex: 535 nm / Em: 617 nm (匹配 TRITC/CY3 红光通道) |
| 二、 LF200 倒置荧光显微镜核心硬件优势 |
1. 高度集成一体化 LED 荧光激发系统：支持无级亮度调节与多通道自动光强记忆。
2. 超长工作距离聚光镜（最大 172mm）：适应多孔板及高培养瓶。
3. 低手位传动与 100% 通光率左下倾侧接口：操作舒适且利于弱荧光采集。
| 三、 标准化应用流程 5 步实施细则 |
| STEP 01 | 工作液配制与样品洗涤 | 使用 PBS 将 AO/PI 配制成工作液（AO 约 5–10 μg/mL，PI 约 10–20 μg/mL），样品洗涤 1–2 次消除干扰。 |
| STEP 02 | 混合染色与短时温育 | 按 1:1 混合或直接加入培养孔，室温避光孵育 5–10 分钟，建议 20 分钟内完成采集。 |
| STEP 03 | 快速上样与相衬聚焦 | 样品固定于载物台，开启暖色 LED 明场，转动相衬盘利用低手位手轮快速锁定视野。 |
| STEP 04 | 多通道荧光图像采集 | 切至 FITC 通道采集绿光活细胞，切至 TRITC 通道采集红光死细胞（系统自动还原设定光强）。 |
| STEP 05 | 图像叠加与定量分析 | 通过软件对双通道图像进行 Merge 叠加，自动计算细胞存活率：Vitality (%) = [Live / (Live + Dead)] × 100%。 |
| 四、 典型图像数据评估 |
LF200 下采集的高信噪比细胞荧光图谱（亮视野与极低背景噪点）
| 五、 操作规范与保养要点 |
• 控制孵育时间在 20 分钟内完成采集。
• 利用无级调光与光强记忆功能适度降低 LED 功率。• 定期清理载物台及防溢凹槽，保持透镜表面洁净。
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