什么是自发荧光（Autofluorescence, AF）？
自发荧光是指细胞本身的内源性物质（如NADH、FAD、芳香族氨基酸等）在特定波长激发下产生的荧光信号。
在流式细胞术中，自发荧光会干扰弱标记信号的检测，尤其在400–600 nm波段影响严重，导致：

• 荧光信号识别不清，弱阳性信号被掩盖
• 髓系细胞、死细胞等高AF细胞造成假阳性
• 结果可重复性与分析特异性降低

 
为什么光谱流式也难以直接解决AF问题？
尽管光谱流式细胞术具备全波段光谱解混能力，但自发荧光仍是挑战：

难点	表现
异质性强	不同细胞AF光谱差异大，难统一建模
信号叠加	高AF会掩盖低丰度靶标
光谱重叠	AF光谱与染料发射谱重合，易误判

图：AF在光谱流式中的典型干扰
图示案例中展示了：
A. 各类细胞AF背景差异
B. 高AF导致弱信号消失
C. AF与目标染料光谱重合，干扰解混
 
 CytoFLEX mosaic如何破解AF干扰？
贝克曼库尔特CytoFLEX mosaic光谱流式分析仪，从底层设计上强化了解决AF问题的能力：
核心优势：

• 提供10个未染色通道：支持多通道AF提取建模
•  支持异质性样本分析：构建不同细胞群的AF特征
•  搭载Poisson Hybrid解混算法：提升信号精度，降低假阳性率
• 实时异常通道预警机制：确保数据准确可靠

 
实验验证：AF建模如何改善数据质量？
使用CytoFLEX mosaic评估白细胞群体谱解混效果。通过分别引入0、1、2、4个自发荧光特征，比较CD16在不同白细胞亚群中的表达结果：

• 未去除AF时，假阳性信号较多
• 去除4个AF特征后，保留真实信号，明显提升弱信号可分辨性
• 涉及细胞群体：中性粒细胞、嗜酸粒细胞、单核细胞、淋巴细胞

结论：AF提取+多通道解混显著提升了解析准确性。
 
光谱流式中自发荧光的四大应对策略

策略	说明
1. 将AF视为内源性荧光	可利用其光谱特征提高低丰度标记识别能力
2. 使用多对照捕获AF变异	CytoFLEX mosaic支持10个未染色通道，适用于复杂样本
3. 使用微球/细胞对照校正串联染料	防止AF叠加影响解混
4. 结合降维、门控聚类方法	Poisson Hybrid算法提高解混分群精度

 
软件支持与用户体验
CytoFLEX mosaic搭配的软件 CytExpert for Spectral：

• 界面简洁，易于上手
• 解混结果实时验证，支持通道问题自动提示
• 图形化显示，有效辅助策略优化与门控调整

推荐阅读与参考资料

1. Overcoming Autofluorescence in Spectral Flow Cytometry Analysis
2. Enhanced Spectral Unmixing of White Blood Cell Populations

结语：精准识别，从自发荧光开始
光谱流式不再“怕光”！
CytoFLEX mosaic通过自发荧光多通道提取 + 高级算法，打破AF困境，重塑多色流式分辨率上限。是实现高灵敏、低背景、弱信号可见化的关键利器。