方案摘要：猪繁殖与呼吸综合征，是由病毒（PRRSV）感染猪引起的一种高度传染性疫病，临床表现为母猪繁殖系统障碍，断奶仔猪消瘦、生长迟缓以及死亡率增加。该病能引起猪体温升高、呼吸困难，导致猪耳朵发绀，又称蓝耳病，Pipetty 电动移液器通过高精度分液、智能化控制及高效操作，全面优化了 IPMA 的关键环节，尤其在样本处理、免疫反应及结果判读中显著提升实验可靠性与效率。其技术优势不仅满足当前猪蓝耳病毒检测的标准化需求，更为未来自动化检测平台的搭建提供了核心工具支持。
 
方案详情：
一、实验原理
      猪蓝耳病免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）是检测猪繁殖与呼吸综合征（PRRS） 的经典血清学方法，核心用于检测猪血清中的 PRRS 病毒特异性抗体，通过观察细胞是否出现变色，可判断血清中是否存在 PRRS 抗体。
二、‌实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-250、MSIC01-02-1000及配套吸头；
② 倒置生物显微镜。
 
2、试剂和材料
① IPMA 诊断板；
② PRRSV 阳性血清、阴性血清和 HRP-兔抗猪IgG结合物；
③ 洗涤液；
④ 血清稀释液和显色/底物溶液。
 
三、实验步骤
1、稀释血清样本：使用Pipetty电动移液器的连续分液功能，在空板的A排和E排各孔分别加入 180μL的血清稀释液，其余各孔加120μL。将 20 μL被检血清和对照血清分别加入 A 排和E排各孔（1：10 稀释），摇动混匀；从 A排和 E排各孔内取 40 μL 分别加入 B排和F排孔，依次做1：40、1∶160、1∶640 稀释。
 
2、设置连续分液模式，吸取上述板中稀释血清样本，按每孔/50μL，分别加入 IPMA 诊断板的相应孔内，封板后 37 ℃孵育1h，弃去液体，用 0.15 mol/mL NaC1（含 0.5%吐温-80）洗板3次。
 
3、用 0.15 mol/L，NaC1（含0.5%吐温-80）稀释 HRP-兔抗猪 IgG 结合物为工作浓度，使用连续分液功能，按每孔50 μL，结合物稀释液于板的孔中，封板后 37 ℃孵育1 h，洗涤3次。
4、在各孔中加入50μL显色剂/底物溶液（AEC-H₂0₂），在 18 ℃~22 ℃室温下作用至少 30 min，弃去液体，加入 50 μL 0.05 mol/L 醋酸钠溶液。
四、结果判定
1、试验成立条件：将 IPMA 诊断板置于倒置生物显微镜下观察。阳性血清对照孔细胞质呈现深红色的特异性染色，阴性血清对照孔细胞质不被染色。
2、被检血清样本孔 30%~50%的细胞质呈现深红色，判定为免疫过氧化物酶单层试验阳性（IPMA+）：细胞质未被染色，判定为免疫过氧化物酶单层试验阴性（IPMA一）。与阳性血清对照相比，若整孔细胞被染色，则视为血清样本的非特异性反应。血清滴度以 50%以上的孔染色的最高稀释度的倒数表示。血清样本的滴度<10 判定为阴性；血清样本的滴度为 10或 40判定为弱阳性，非特异性染色常在此范围内：血清样本的滴度≥160判定为阳性。