在细胞治疗与基因功能研究中，研究人员常面临两难选择：mRNA表达快速但转瞬即逝，病毒载体虽能持久表达却存在基因组整合带来的安全风险。
如今，Portal公司带来了第三种选择——多重环状RNA递送技术，真正实现“鱼与熊掌兼得”：既能获得持久、高效的蛋白表达，又无需持久性改变细胞基因组。
 
谁将是Portal技术的受益者？
细胞治疗团队：如果您正在寻找持久性基因修饰（如病毒转导）的替代方案，以开发更安全的下一代细胞疗法。
研发与工艺开发人员：如果您需要在原代细胞中长时间过表达目标基因，用于功能研究或工艺优化，同时希望跳过繁琐、耗时的稳转细胞系构建过程。
 
四大核心优势
表达持久稳定：mRNA的半衰期很短，蛋白表达通常仅维持1–2天。而Portal递送的环状RNA凭借其独特的共价闭合环状结构，能够抵抗核酸外切酶的降解，在细胞内稳定表达超过5天，为长期功能研究提供保障。
无基因组整合风险：环状RNA在细胞质内独立翻译，不进入细胞核，不会整合至宿主基因组。在获得持久生物学效应的同时，避免了因基因插入突变引发的潜在安全风险。
无需碱基修饰：与传统mRNA不同，通过Portal机械穿孔技术递送的环状RNA，无需进行碱基修饰（如假尿嘧啶） 即可实现高效、稳定的蛋白表达，不仅简化生产工艺，也进一步降低了成本。
灵活的多重共递送：Portal专利的机械穿孔技术可轻松将多种环状RNA分子（如治疗性CAR基因与增强因子）按特定比例共同导入同一细胞，实现协同增效的“多重工程化”，为复杂细胞疗法设计开辟新路径。
 
数据印证实力:环状RNA在表达与功能上均表现卓越
验证一：环状RNA在免疫细胞中表达持久性显著优于mRNA
为评估环状RNA与mRNA的表达稳定性，本研究在体外培养的PBMC及纯化T细胞中，分别转染编码GFP报告基因的环状RNA与线性mRNA。mRNA组在转染后48小时内表达水平急剧下降，而环状RNA组在相同时间内维持稳定表达，直至第5天仍检测到显著荧光信号（图1）。
进一步采用突变型IL-2环状RNA增强T细胞功能，证实环状RNA可支持mbIL-2的持续分泌（图2），并显著提升CAR-T细胞对CD19阳性靶细胞杀伤活性（图3），其效应强度与表达持续时间呈正相关。 图1. 与mRNA相比，环状RNA在人类原代PBMC中的表达强度更高，且能持续长达10天之久。  
验证二：多重工程化实现协同高效杀伤
在更复杂的工程化T细胞中，我们构建了共表达CD19嵌合抗原受体与双功能增强因子（mbIL-2/IL-12）的环状RNA递送系统。通过优化共递送方式，当CD19 CAR与mbIL-12环状RNA同时转导时，实现了CAR与细胞因子的高效协同表达（图3）。
功能验证显示，经该联合增强方式处理的T细胞在效靶比3:1条件下，对CD19阳性肿瘤细胞杀伤效率显著提升，细胞毒性检测显示杀伤率超过90%（图4），较单一CAR表达组表现出统计学差异（p<0.01）。 图3. 在T细胞导入（boost）48小时后，通过流式细胞术检测CD19 CAR与mblL-12的表达情况。
   
核心技术支撑:高效低损伤的机械挤压穿孔技术
本研究所采用的递送技术核心在于‌专利的机械挤压递送系统（Portal技术）‌。与电穿孔技术通过高压电场诱导细胞膜不可控破裂不同，Portal技术基于可控的物理力学机制，在细胞膜上瞬时形成直径约50-200 nm的纳米级孔道，实现环状RNA等大分子物质（分子量>100 kDa）的高效胞内递送。该过程具备以下技术优势：
细胞相容性‌：机械挤压作用力可精确控制，显著降低细胞膜损伤（细胞存活率>95%），避免电穿孔导致的细胞应激反应等。
递送效率‌：通过优化挤压参数（压力梯度、作用时间等），可使环状RNA在T细胞中的转染效率达85%以上，较传统电穿孔提升2-3倍。
功能保持‌：经Portal技术处理细胞保持完整细胞周期分布，为后续功能验证提供可靠细胞模型。  
未来展望
Portal环状RNA递送平台为解决细胞治疗与基础研究中“表达时长”与“安全性”之间的矛盾，提供了一个强大而灵活的工具。无论是开发更安全的现货型细胞疗法，还是开展复杂的基因功能筛选，这项技术都将助力您加速创新。
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