一、研究背景与科学问题
慢性乙型肝炎病毒感染是全球性的重大公共卫生问题，干扰素-α是临床治疗的重要手段之一。其疗效依赖于直接的抗病毒作用和对免疫系统的间接调节。然而，HBV主要感染的肝实质细胞本身对IFN-α的应答能力有限，而肝内的非实质细胞（如巨噬细胞）却能产生并传递强烈的IFN-α诱导的抗病毒效应。前期研究发现，巨噬细胞等非实质细胞可通过释放外泌体，将IFN-α诱导的抗病毒活性传递至HBV复制的肝细胞中，从而有效抑制病毒复制。但外泌体如何进入靶细胞、释放其内容物以传递这一抗病毒信号，其详细的分子机制尚不明确。阐明这一过程，对于理解IFN-α抗HBV的完整作用网络及开发新型抗病毒策略至关重要。

二、核心发现：外泌体"模拟"病毒的完整入侵通路
该研究系统揭示了巨噬细胞来源的外泌体传递抗病毒效应的完整路径，发现其巧妙地"借用"了病毒入侵宿主细胞的多个关键步骤。

1. 表面受体识别与结合：研究发现，巨噬细胞外泌体表面暴露有磷脂酰丝氨酸。PtdSer作为一种"吃我"信号，可被肝细胞表面的T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-1受体识别并介导结合。TIM-1是已知的甲型肝炎病毒等多种病毒的进入受体。研究证实，抑制肝细胞TIM-1的表达，会显著阻碍外泌体的内吞及其抗病毒效应的传递。

2. 网格蛋白与大胞饮介导的内吞：结合后，外泌体主要通过两种病毒常用的内吞途径进入肝细胞：
- 网格蛋白介导的内吞：使用特异性抑制剂或敲低网格蛋白重链，可有效抑制外泌体的摄取。
- 大胞饮作用：外泌体处理可刺激肝细胞的液相内吞（大胞饮的标志），而典型的大胞饮抑制剂能显著阻断其进入。有趣的是，该过程不依赖于经典大胞饮调控蛋白Rac1和Cdc42，提示可能存在一条非典型的大胞饮途径。阻断上述任一内吞途径，均会削弱外泌体传递的抗病毒效应。

3. 内体膜融合与内容物释放（内体逃逸）：内吞后，外泌体并未被导向溶酶体降解，而是通过与晚期内体/多囊泡体的膜发生融合，将其内容物释放至细胞质中。这一过程类似于病毒的内体穿透机制。研究通过活细胞成像观察到外泌体与晚期内体标志蛋白RAB7、多囊泡体标志蛋白CD63的共定位及膜融合信号。进一步发现，内体中一种与病毒膜融合密切相关的脂质——溶血双磷脂酸，在该融合过程中起关键作用，封闭LBPA会抑制融合并导致外泌体内容物被溶酶体降解。

三、IFN-alpha/beta R1 His Tag 蛋白在研究中的关联意义
尽管本研究聚焦于外泌体传递的抗病毒"效应"本身，而非IFN-α与其受体的直接结合，但IFN-alpha/beta R1 His Tag 蛋白 作为I型干扰素信号通路的起点，在相关的上下游机制研究中具有重要价值。

1. 上游信号验证：在探究巨噬细胞如何响应IFN-α产生"可传递的抗病毒状态"时，该重组蛋白可作为工具，验证IFN-α与巨噬细胞表面IFNAR1的结合及下游STAT等通路的激活，这是启动抗病毒基因表达、进而可能调控外泌体内容物装载的前提。

2. 内容物成分研究的参照：外泌体中传递的关键抗病毒效应分子可能为IFN刺激基因产物或非编码RNA。在研究这些分子的产生机制时，IFN-α信号的完整激活是需要验证的环节，IFN-alpha/beta R1 His Tag 蛋白 可用于相关的受体结合或信号阻断实验。

3. 比较研究工具：该蛋白有助于在平行研究中，对比"经典"的IFN-α直接信号传导与本研究揭示的"外泌体介导"的信号传递在效率、动力学和效应谱上的差异。

外泌体通过模拟病毒入侵机制传递IFN-α抗病毒信号的机制研究-南京优爱(UA BIO), 重组蛋白专家