PRRSV 分为美洲型（如 VR-2332、JXA1、HuN4 等）和欧洲型（如 LV、NADC30 等），单克隆抗体（mAb）的研发通常针对不同毒株的特异性抗原，常见毒株型号及对应靶点如下：

• 经典毒株：如 VR-2332（美洲型原型株）、LV（欧洲型原型株），用于制备广谱识别毒株的 mAb。
• 变异毒株：如 JXA1、HuN4（高致病性 PRRSV，中国流行株）、NADC30-like（北美变异株），mAb 可针对其独特的抗原表位。
• 抗原靶点： 
  • GP5 蛋白：囊膜糖蛋白，是 PRRSV 最主要的抗原蛋白，mAb 可识别其线性或构象表位，用于病毒中和及检测。
  • N 蛋白：核衣壳蛋白，保守性高，mAb 常用于 ELISA、WB 等检测方法，特异性识别病毒核酸结合蛋白。

• 亚型：以小鼠来源 mAb 为例，常见亚型为 IgG1、IgG2a、IgG2b，少数为 IgM（如针对 N 蛋白的 mAb 可能以 IgG1 为主）。
• 纯度：通过亲和层析（Protein A/G）或离子交换层析纯化后，纯度可达 95% 以上，适用于高灵敏度检测。

• 效价： 
  • 细胞培养上清液效价：通常为 1:256～1:1024（ELISA 法测定）。
  • 小鼠腹水效价：可达 1:10⁵～1:10⁶，甚至更高（如针对 GP5 的中和性 mAb 腹水效价可＞1:2×10⁶）。
• 特异性： 
  • 与 PRRSV 其他亚型（如美洲型与欧洲型）可能存在交叉反应，但高特异性 mAb 可区分不同毒株（如仅识别美洲型 GP5 的 mAb 与欧洲型无交叉反应）。
  • 与其他猪病病毒（如猪瘟病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒等）无交叉反应，可通过交叉反应实验验证（如 ELISA、IFA）。

1. 抗原制备： 
   • 纯化 PRRSV 全病毒（灭活或亚单位抗原，如 GP5 重组蛋白），或合成 GP5、N 蛋白的特异性抗原表位肽段。
2. 动物免疫： 
   • 免疫 BALB/c 小鼠（4～6 周龄），通过皮下 / 腹腔注射抗原，间隔 2～3 周加强免疫，共 3～4 次，最后一次免疫后 3～5 天取脾细胞。
3. 细胞融合与筛选： 
   • 脾细胞与骨髓瘤细胞（如 SP2/0）按 5:1 比例融合，加入 HAT 培养基筛选杂交瘤细胞。
   • 通过间接 ELISA、免疫荧光（IFA）或病毒中和试验（VN）筛选阳性克隆，重点筛选针对 GP5 高亲和力或中和活性的 mAb。
4. 克隆化与生产： 
   • 采用有限稀释法克隆化杂交瘤细胞，直至单克隆稳定性达标。
   • 通过小鼠腹腔注射（制备腹水）或无血清培养（细胞培养上清）生产 mAb，纯化后冻干或液体保存。

• 抗原针对性：以 PRRSV 特异性蛋白（如 GP5）为抗原，避免与其他病毒蛋白交叉。
• 多轮筛选：通过 IFA 检测 mAb 与 PRRSV 感染细胞的结合，排除与正常细胞的非特异性反应；通过交叉反应实验（如与猪瘟病毒、伪狂犬病毒等共孵育）验证特异性。
• 中和活性验证：针对 GP5 的 mAb 需验证其病毒中和能力（如 VN 试验），确保靶向病毒入侵关键表位。

1. 病毒检测与诊断：

   • ELISA 试剂盒：以抗 N 蛋白 mAb 为捕获抗体，抗 GP5 mAb 为检测抗体，用于血清、组织液中 PRRSV 抗原的定量检测。
   • 免疫荧光（IFA）：标记荧光素的 mAb 用于检测细胞或组织中的病毒抗原，辅助病理诊断。
   • 胶体金试纸条：基于 mAb 的免疫层析技术，快速检测猪鼻腔分泌物、精液中的 PRRSV。

2. 病毒中和与治疗研究：

   • 高中和活性的抗 GP5 mAb 可用于体外抗病毒实验，或作为被动免疫制剂的候选（如猪群紧急接种）。

3. 病毒学基础研究：

   • 用于 PRRSV 复制机制研究（如 mAb 阻断 GP5 与宿主细胞受体结合）、抗原表位分析（如突变株竞争结合实验）。

• 美国 ABclonal 公司：抗 PRRSV N 蛋白 mAb（克隆号 PRRS-10），亚型 IgG1，适用于 ELISA、WB、IFA，特异性识别美洲型毒株。
• 中国兽医药品监察所研发产品：抗 PRRSV GP5 蛋白 mAb（如 4B7 株），可中和高致病性 JXA1 株，用于疫苗效力评价。

• 毒株特异性：不同 mAb 对 PRRSV 亚型的识别能力不同，需根据目标毒株（如美洲型 / 欧洲型、经典株 / 变异株）选择合适的 mAb。
• 应用场景适配：中和性 mAb 适用于抗病毒研究，而抗 N 蛋白 mAb 更适合检测病毒核酸结合蛋白（如病毒载量分析）。
• 保存条件：纯化 mAb 需在 - 20℃或 - 80℃冻存，避免反复冻融，液体形式可加入 0.05% 叠氮钠防腐。