抗猪塞内加谷病毒（Seneca Valley Virus, SVA）单克隆抗体在病毒检测、致病机制研究及防控技术开发中具有关键作用。以下从毒株型号、抗体特性、制备方法、特异性参数及应用场景等方面详细阐述相关技术参数：

SVA 属于小 RNA 病毒科，目前全球分离株均属于单一血清型，但根据 VP1 基因序列可分为不同基因型（如 Genotype 1 和 Genotype 2），代表性毒株如下：

• VP1 结构蛋白： 
  • 构成病毒衣壳的主要表面抗原，含中和表位（如 G-H 环、C 端高变区） 和型特异性表位，其中 G-H 环（氨基酸 150-165）为广谱中和抗体的主要靶点。
• VP2/VP3 蛋白： 
  • 内部结构蛋白，含群特异性保守表位，可用于病毒通用检测（如 ELISA 包被抗原）。

1. 杂交瘤细胞株构建：

   • 免疫原：重组 VP1 蛋白（如 SVV-OHIO-2014 株 VP1 的 1-300aa 片段，原核表达后纯化）或灭活病毒颗粒（SVV-001 株）。
   • 融合细胞：SP2/0 骨髓瘤细胞与免疫小鼠（BALB/c）的脾细胞融合，通过间接 ELISA 筛选阳性克隆，克隆化培养采用有限稀释法（3 次）。
   • 抗体纯化：Protein G 亲和层析，纯度＞95%，内毒素＜0.1 EU/mg，抗体浓度 1-2 mg/mL。

2. 特异性验证指标：

   • 交叉反应： 
     • 与口蹄疫病毒（FMDV）、猪水疱病病毒（SVDV）等小 RNA 病毒无交叉反应（ELISA/IFA 验证）。
     • 与猪圆环病毒（PCV）、猪瘟病毒（CSFV）等非小 RNA 病毒无结合（Western blot 阴性）。
   • 中和活性：对同源毒株（如 SVV-OHIO-2014）的空斑减少率≥95%（抗体浓度 5 μg/mL），对异源毒株（如 SVA-CHN-2018）中和效率≥80%。

1. 双抗体夹心 ELISA： 
   • 包被抗体：5E10 株单抗（10 μg/mL），检测抗体：HRP 标记的中和型单抗（1:5000 稀释），检测限（LOD）=1 ng/mL SVA 抗原。
2. 免疫荧光（IFA）： 
   • 抗体浓度：10 μg/mL，可识别感染 SVA 的 PK-15 细胞内病毒抗原，荧光强度（MFI）＞2000，特异性荧光呈细胞质颗粒状分布。
3. 病毒中和试验（VNT）： 
   • 中和型单抗（如 5E10）在 1:512 稀释时可完全抑制 SVV-OHIO-2014 株感染，IC₅₀测定值为 1.2 ng/mL，对 Genotype 2 毒株 IC₅₀=3.5 ng/mL。

• 抗原变异监测：通过单抗结合试验（MABA）分析野外毒株 VP1 的抗原漂移，例如 Genotype 2 毒株 VP1 第 295 位氨基酸突变（A→V）可导致 3C7 株单抗结合效率下降 50%。
• 疫苗效力评价：使用中和型单抗检测免疫猪血清中的中和抗体滴度，评估疫苗对不同基因型毒株的交叉保护能力（如 Genotype 1 疫苗对 Genotype 2 的保护率需通过 VNT 验证）。

1. 基因型差异影响： 
   • 由于 SVA VP1 高变区存在基因型差异，建议根据目标毒株基因型选择单抗： 
     • 通用检测（如临床样品初筛）优先使用针对 VP1 保守区或 VP2 的广谱单抗（如 5E10、VP2 特异性单抗）。
     • 分型研究需结合 Genotype 1/2 特异性单抗（如 3C7 株针对 Genotype 2）。
2. 检测方法优化： 
   • 检测临床样品（如水疱液、口腔拭子）时，建议先用 VP2 群特异性单抗进行 ELISA 初筛，再用 VP1 型特异性单抗进行基因型鉴定。
   • 中和试验需在含 10% 胎牛血清的培养基中进行，以模拟体内抗体环境，孵育时间≥48 小时。
3. 抗体保存与效价： 
   • 纯化单抗需分装保存于 - 20℃，避免反复冻融；工作液（1×PBS 稀释）4℃可保存 2 周，效价下降≤10%。