方案摘要：本方案旨在检测肝素抗凝活性，为提升实验室液体处理的精准性与效率，引入 Pipetty 电动移液器。依托其专利温度控制技术，通过内置传感器实时校正手部热量导致的误差，完美适配高精度实验需求。笔式操作设计大幅降低手部劳损，避免腱鞘炎风险。一键连续分液功能可将重复移液时间缩短 1/2 至 2/3，且适配主流品牌吸头，无需额外采购成本。该设备能消除人工操作差异，保障实验重复性，同时提升工作效率，为科研质量与人员体验双重赋能。
 
方案详情：
一、实验原理
      正常血浆含完整凝血因子，用枸橼酸钠去除钙离子后，凝血过程停滞；重新加入钙离子（“复钙”）可激活内源性凝血途径，血浆逐渐凝固。肝素能增强抗凝血酶 Ⅲ 活性，抑制凝血因子 Ⅱa（凝血酶）、Ⅸa、Ⅹa 等关键因子，显著延缓复钙后的凝血进程。通过测定复钙后血浆出现纤维蛋白凝块的时间，可间接反映体内或体外肝素对凝血系统的抑制强度，进而评估肝素抗凝效果，为临床调整肝素剂量提供依据。
 
二、‌实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-1000、MSIC90-001-10mL；
② 恒温水浴箱 37℃±0.5℃；
③ 玻璃试管；
④ 采血针。
 
2、试剂和材料
① 肝素标准品；
② 供试品；
③ 氯化钠注射液；
④ 兔血浆；
⑤ 枸椽酸钠溶液。
 
 
三、实验步骤
1、标准品溶液的制备：精密称取肝素标准品适量，按标示效价加灭菌注射用水溶解使成每1mL中含100单位的溶液，分装于适宜的容器内，4～8℃贮存。
2、标准品稀释液的制备：试验当日，使用Pipetty电动移液器，精密量取标准品溶液，按高、中、低剂量组（dS₃、dS₂、dS₁）用氯化钠注射液配制成3种浓度的稀释液，相邻两浓度的比值（r）应相等；调节剂量使低剂量组各管的平均凝结时间较不加肝素对照管明显延长，一般以大于1.5倍空白血浆的凝结时间为宜。高剂量组各管的平均凝结时间，以不超过30分钟为宜，其稀释液一般可制成每1mL中含肝素0.5～1.5单位，r为1∶0.85左右；
　3、供试品溶液与稀释液的制备：按供试品的标示量或估计效价（AT），制成高、中、低(dT₃、dT₂、dT₁）3种浓度的稀释液。相邻两浓度之比值（r）应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组的凝结时间应相近。
 
　　4、血浆的制备：迅速收集兔或猪血置预先放有109mmol/L枸椽酸钠溶液的容器中，枸椽酸钠溶液与血液容积比为1∶9，边收集边轻轻振摇，混匀，室温下1500×g离心不少于15分钟（g为重力常数）。立即吸出血浆，并分成若干份分装于适宜容器内，低温冻结贮存。临用时置37℃±0.5℃水浴中融化，用两层纱布或快速滤纸过滤，使用过程中在4～8℃放置。
　5、取管径均匀、清洁干燥的小试管若干支，使用Pipetty电动移液器，设置连续分液模式，分别加入500μL血浆，置37℃±0.5℃恒温水浴中5～10分钟后，依次每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液400μL及100μL 1%氯化钙溶液，每种浓度不得少于3管，各浓度的试管支数相等，加入1%氯化钙溶液后，立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，注意观察并记录各管凝结时间。
 
四、结果判定
1、持续观察血浆状态，当出现肉眼可见的纤维蛋白凝块时，记录所需时间，即为 “肝素凝血时间”。每次检测需同时做 “正常对照血浆”，确保试剂和操作无误差。
2、本法的可信限率（FL%）不得大于5%。