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Pipetty Pro电动移液器在蛋白质含量测定(双缩脲法)中的应用

2025-10-21     来源:广州程淇生物     点击次数:49

方案摘要:在双缩脲法测定蛋白质含量等需精密量取多梯度体积溶液的实验中,Pipetty Pro 非等量连续加样枪可显著提升操作效率与精度。其核心优势在于:支持非等量连续加样,无需反复更换枪头或调整参数,可一次性完成对照品 0.2-1.0mL 梯度量取及供试品灵活取样,减少操作步骤达 60% 以上;精度高,移液误差小,满足实验 “精密量取” 要求;人体工学设计降低操作疲劳。不仅有效缩短实验时间,还可以降低人为误差,为标准曲线建立及供试品测定提供稳定可靠的移液支持,尤其适合多组平行实验及梯度浓度配置场景。
 
方案详情:
一、实验原理
       
双缩脲试液与蛋白质中的肽键反应,生成紫色络合物。该络合物在 540nm 波长下的吸光度,与蛋白质浓度在一定范围内呈线性关系,可通过对照品的线性回归方程计算供试品中蛋白质的浓度。
 
二、实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC12-01-1000、MSIC90-001-10mL;
② 紫外-可见分光光度计;
③ 玻璃试管;
④ 计时器。
 
2、试剂和材料
① 双缩脲试液 
② 对照品溶液 
③ 供试品溶液
 
三、实验步骤
1、对照品组操作
a) 使用Pipetty Pro 非等量电动移液器,在平板上提前设置好分液量,分别是 0.0mL(空白管)、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL,吸取试剂,连续加至试管中。
 
b) 重复上一个移液步骤,向每支试管中加水至总体积 1.0mL,确保各管体积一致。
c) 每管分别加入双缩脲试液 4.0mL,立即混匀,避免局部反应不均。
d) 室温放置 30 分钟,保证反应充分进行。
e) 测定吸光度:按紫外 - 可见分光光度法,在 540nm 波长处测定各管吸光度,以 0 号空白管调零。
2、供试品组操作
a) 根据供试品预期蛋白质浓度,使用Pipetty Pro 精密量取适量供试品溶液精密量取适量供试品溶液,使最终吸光度落在对照品吸光度范围内,置于具塞试管中。
b) 重复对照品组的 “定容→加试剂→混匀→室温放置 30 分钟” 操作。
 
c) 在相同 540nm 波长下,以 0 号空白管调零,测定供试品溶液吸光度。
 
四、结果判定
1、以对照品溶液的浓度为横坐标(X),对应的吸光度为纵坐标(Y),计算得到线性回归方程(Y = aX + b)。
2、将供试品的吸光度代入线性回归方程,反算出供试品溶液中蛋白质的浓度。
3、将供试品溶液浓度乘以供试品的稀释倍数,得到供试品中蛋白质的实际含量。
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