方案摘要:为提升试验效率本方案引入了 Pipetty Pro 非等量电动移液器优化实验流程。利用其核心非等量移液功能,可精准完成对照品溶液 0.01-0.1mL 梯度体积移取,无需反复调整量程,减少操作步骤与误差累积。该移液器 75g 轻量化设计适配长时间操作,温度自动补偿技术可校正手热导致的体积偏差,且能精准移取酸性染色液等试剂。通过提升移液准确性与效率,有效优化标准曲线线性相关性,确保供试品蛋白质浓度计算可靠,尤其适用于批量样品的微量精准测定。
方案详情:
一、实验原理在酸性溶液中考马斯亮蓝G250与蛋白质分子中的碱性氨基酸(精氨酸)和芳香族氨基酸结合形成蓝色复合物,在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比,以蛋白质对照品溶液作标准曲线,采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。灵敏度高,通常可测定1~200μg的蛋白质量。
二、
实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC12-01-250;
② 玻璃比色皿;
③ 玻璃试管;
④ 紫外-可见分光光度计。
2、试剂和材料
① 酸性染色液;
② 对照品溶液;
③ 供试品溶液。
三、实验步骤
1、使用Pipetty Pro非等量电动移液器,在小程序上提前预设好每次分液的体积,一次吸取对照品溶液,依次加:0.0mL(空白管)、0.01mL、0.02mL、0.04mL、0.06mL、0.08mL、0.1mL到具塞试管内。
2、所有试管均加水至 0.1mL,保证最终体积一致。
3、每管再加入酸性染色液 5.0mL,加入后需立即混匀。
4、测定波长固定为595nm,立即测定吸光度。并以 0 号管作为空白对照,用于扣除背景干扰。
5、以 “对照品溶液的实际浓度” 为横坐标(x) ,以 “对应测得的吸光度” 为纵坐标(y) ,使用统计工具计算线性回归方程。
注:对照品溶液的实际浓度 = 对照品原液浓度 × 取样体积÷ 最终总容积。
6、根据对照品溶液的浓度,使用Pipetty Pro精密量取 “适量供试品溶液”,取样量需使测得的吸光度落在对照品线性范围内,重复上述 “加水定容→加染色液→测吸光度” 的操作。
四、结果计算
将供试品的吸光度代入线性回归方程,计算出 “供试品溶液的测定浓度”。
最终蛋白质含量 = 测定浓度 × 供试品的稀释倍数