方案摘要：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性，是革兰氏阳性菌的代表菌株，也是常见的食源性致病微生物。本次实验采用Baird-Parker平板培养法，搭配Pipetty电动移液器实现牙膏中金黄色葡萄球菌的精准、高效检测，相比传统手动移液器，显著提升了检验过程的准确性、便捷性与重复性。
 
方案详情：
一、实验准备
1、仪器和设备
① 显微镜。
② 恒温培养箱：36℃±1℃。
③ 离心机。
④ 恒温水浴箱。
⑤ 试管：18 mm×150 mm。
⑥ 载玻片。
⑦ 酒精灯。
⑧ 三角瓶：250 mL。
⑨ 高压灭菌器。
⑩ 灭菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直径90 mm。
⑭ Pipetty电动移液器0.1-20μL、5-1000μL、1-10ML。
 
2、培养基和试剂
① SCDLP 液体培养基
② 营养肉汤
③ 7.5%氯化钠肉汤
④ Baird Parker平板
⑤ 血琼脂平板
⑥ 甘露醇发酵培养基    
⑦ 灭菌液体石蜡
⑧ 兔（人）血浆制备
 
二、 实验步骤
1、采用Pipetty 10 mL电动移液器进行培养基分装，通过预设量程直接精准分装90 mL SCDLP液体培养基至三角烧瓶。后续置于36℃±1℃培养箱，培养24 h±2 h。Pipetty电动移液器通过微型电机控制，精准移取，无残留、无飞溅，确保每个三角烧瓶中培养基与检液比例精准一致，为后续增菌效果的稳定性提供保障。
 

1. 自上述增菌培养液中，用Pipetty 1 mL电动移液器吸取0.1 mL培养液，滴加至Baird Parker平板（或血琼脂平板）中央，采用无菌涂布棒均匀涂布，置36℃±1℃培养48 h±2 h。菌落特征：血琼脂平板上菌落呈金黄色，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈；Baird Parker平板上为圆形、光滑、凸起、湿润，颜色呈灰色到黑色，边缘淡色，周围有混浊带及外层透明带，菌落质地似奶油树胶。挑取单个菌落分纯至血琼脂平板，置36℃±1℃培养24 h±2 h。

 

1. 如需进行菌液涂片，可使用Pipetty 0.1-20 μL微量电动移液器吸取少量菌悬液，滴加至载玻片中央，避免传统操作中菌量过多导致染色不均。镜检特征：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无荚膜，致病性菌株菌体直径约0.5-1 μm。

4、挑取分纯后的菌落接种到甘露醇发酵培养基中，吸取灭菌液体石蜡，精准滴加2-3 mm高度至培养基液面，置36℃±1℃培养24 h±2 h。判定标准：金黄色葡萄球菌能发酵甘露醇产酸，培养基颜色由紫变黄。
5、用Pipetty 电动移液器吸取1:4新鲜血浆0.5 mL置于灭菌小试管中，加入待检菌24 h±2 h营养肉汤培养物0.5 mL，混匀后置36℃±1℃恒温环境，每半小时观察一次，6 h内出现凝块即为阳性。对照设置：用同一移液器分别移取阳性菌株、阴性菌株培养物及空白营养肉汤各0.5 mL，与0.5 mL血浆混合，确保对照样品加样量与待检样品完全一致。
 
6、从营养琼脂平板挑取纯化可疑菌落，用Pipetty电动移液器吸取无菌稀释液，精准制备浊度适当的菌悬液，确保菌悬液浓度标准化，提升鉴定系统的匹配度与鉴定准确性。
三、结果报告
被检样品经增菌分离培养后，平板上出现可疑菌落，经染色镜检证实为革兰氏阳性葡萄球菌，且甘露醇发酵试验产酸、血浆凝固酶试验阳性者，可报告检出金黄色葡萄球菌。