方案摘要：本方案适配 Pipetty Pro非等量电动移液器，精准检测食品、酒类等样品中甲醛。Pipetty 以高精度、防交叉污染及温度补偿设计，贯穿关键环节：试剂配制时精准量取磷酸等试剂，保障缓冲液 pH 稳定；在标准中间液制备中，精准移取标准液稀释，规避浓度偏差。标准曲线配制凭借非等量移液功能，一次性完成梯度移取，确保 R²≥0.999。适配食品企业、检测机构批量检测需求。
 
方案详情：
一、实验原理
       在一定温度下,试样中的甲醛与衍生剂 2,4-二硝基苯肼(DNPH)反应生成甲醛 2,4-二硝基苯腙,净化提取后,经液相色谱分离,二极管阵列检测器或紫外检测器检测,外标法定量。
 
二、‌实验准备
1、设配和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下：
① 高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外检测器;
② 电子天平:感量为 1 mg;
③ 恒温水浴振荡器:可控温度 25 ℃±1℃,精度为 0.1℃;
④ 涡旋混合器;
⑤ 离心机:转速≥4 000 r/min;
⑥ 0.45μm 有机系滤膜;
⑦ Pipetty Pro非等量电动移液器MSIC12-01-1000。
 
2、试剂和材料
① 乙腈(C₂H₃N):色谱纯;
② 磷酸( H₃PO₄);
③ 磷酸氢二钠(Na₂HPO₄);
④ 2,4-二硝基苯肼(C₆H₆N₄O₄);
⑤ 氯化钠(NaCl)。
 
三、实验步骤
1、试样制备
  ① 固体试样：取可食部分，经高速组织捣碎机处理成均匀试样，装入洁净密封容器并做好标识，冷藏（2℃~8℃）保存，避免试样变质。
② 液体试样：密封保存，测试前用涡旋振荡器混匀；含二氧化碳的试样，采用中速滤纸过滤去除二氧化碳，确保试样均一性。
2、试样分析
① 酒类样品：用 Pipetty 电动移液器精准吸取 5.00 mL 试样，注入 50 mL 塑料离心管中。盖紧管盖后涡旋混匀，将离心管置于恒温水浴振荡器中，在 25℃±1℃条件下振摇 1 h。
 
② 向衍生后的试液中立即加入 8 g 氯化钠，涡旋混匀 30 s，以不低于 4000 r/min 的转速离心 5 min。向离心管中再次加入 10 mL 乙腈，涡旋混匀 30 s 后，同条件离心 5 min，收集上层溶液并合并至容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀。将合并后的溶液通过 0.45 μm 有机系滤膜过滤，滤液供高效液相色谱（HPLC）测定。
3、设立空白试验，空白对照除不加试样外，其余操作步骤完全参照 上述步骤执行。
4、仪器参考条件
色谱柱：C18 柱（柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 μm）或性能相当的色谱柱。
流动相：乙腈 - 水（50:50，体积比），建议使用色谱纯试剂，经 0.45 μm 滤膜过滤并超声脱气后使用。
柱温：30℃。
检测波长：350 nm。
流速：1 mL/min。
进样量：20 μL。
5、通过Pipetty Pro电动移液器分别精准吸取 100 mg/L 甲醛标准中间液 0 mL、0.050 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL 和 0.80 mL，注入 7 个 50 mL 塑料离心管中，按照 3.2 的衍生和提取步骤处理，得到质量浓度分别为 0 mg/L、0.25 mg/L、0.50 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L 和 4.0 mg/L 的甲醛标准系列工作液。将标准系列工作液按浓度由低到高依次注入高效液相色谱仪中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
 
6、将试样溶液注入液相色谱仪中,得到相应的峰面积,根据标准曲线得到试样溶液中甲醛的浓度。
注:衍生后所得样液应在24h内进行测定。
四、数据处理
1、试样样中甲醛的含量按式（2）计算。
 
2、在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
3、酒类样品,当取样量为5 mL时,本方法的检出限为 0.3 mg/L,定量限为 1.0 mg/L。
其他样品,当取样量为2g时,本方法的检出限为 1.5 mg/kg,定量限为 5.0 mg/kg。