方案摘要：本方案概括猪圆环病毒间接ELISA完整试验流程，依托Fluidot自动移液工作站精准定量、自动化运行，标准化优化试剂混匀、连续加样等全流程核心操作。该设备移液精度高、运行稳定、自动化程度强，可替代人工移液操作，从根源上规避人工移液偏差、加样不均、操作失误等问题，彻底减轻长时间批量检测带来的人工负荷与手部劳损。通过设备自动化标准化作业，显著提升试验数据重复性、批次检测一致性，统一规范全套试验操作标准，为猪圆环病毒病原鉴定、流行病学调研、大批量样本筛查及日常常态化检测工作，筑牢精准高效、规范统一、质量稳定的实验技术基础。
 
方案详情：
一、实验原理
猪圆环病毒间接 ELISA 试验，利用抗原抗体特异性结合原理开展检测。将病毒核衣壳重组蛋白包被于酶标板作为固相抗原，加入待测血清后，样本中对应的特异性抗体可与抗原结合。洗去未结合杂质，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗，使其与结合态抗体反应。最后加入底物显色，依据显色深浅判定抗体水平，以此判断猪只是否感染圆环病毒。
二、实验准备
1、器材
① Fluidot自动移液工作站及吸头；
② 酶标仪；
③ 恒温培养箱；
④ 洗板机；
⑤ 96孔酶标板。
 
2、试剂
① 包被液；
② 洗涤液；
③ 封闭液及抗体稀释液；
④ 酶标二抗:HRP-山羊抗猪IgG抗体；
⑤ TMB底物液；
⑥ 终止液；
⑦ 包被抗原:重组PCV2Cap蛋白；
⑧ PCV2阳性对照血清；
⑨ PCV2阴性对照血清。
 
三、实验步骤
1、将处理好的样品与试剂、96孔酶标板放置fluidot自动移液工作站的托盘与适配器中。
2、自动吸取一个吸头，用包被液将重组 PCV2 Cap蛋白稀释至终浓度1g/mL,选择连续分液模式，自动吸取8个吸头，100uL/孔包被96孔酶标板,2℃~8℃孵育16h，丢弃吸头。
 
3、弃去板中液体，自动吸取洗涤液洗涤酶标板，每孔300uL洗涤3次，每次3min,最后一次洗完后，将酶标板在吸水材料上拍干。
4、自动更换吸头后，每孔加入200uL封闭液，于37℃封闭3h。弃去板中液体，将酶标板在吸水材料上拍干。
5、自动吸取3个吸头，用抗体稀释液将阳性对照血清、阴性对照血清和待检血清分别做1:150稀释后，丢弃吸头后重新吸取8个新吸头，将稀释后的血清分别加入酶标板中，37℃孵育30min，洗涤酶标板，每次操作后仪器都可自动更换吸头。
 
6、自动吸取一个吸头，用抗体稀释液将HPR-山羊抗猪IgG抗体稀释至工作浓度，更换吸头后，100uL/孔加入酶标板中，37℃孵育15min。按上述洗涤方式，洗涤酶标板。
7、吸取8个吸头，每孔孔加入100uL TMB底物液，室温避光孵育5min。
8、吸取8个吸头，每孔加入50uL终止液，终止显色反应。
 
9、在酶标仪450nm波长处读取各孔 OD值，15min 内成。
四结果判定
1、计算阳性对照平均OD值、阴性对照平均OD值,以及被检血清样品的S/P值。被检血清样品的S/P 值按照公式(1)计算:
S/P=(OD_450-s - OD_450-Nc)/(OD_450-PC - OD_450-Nc)............(1)
式中:
S/P                         样品数值;
OD_450-S                  待检血清样品在450 nm波长处的OD值;
OD_450-NC                  阴性对照血清在450 nm波长处的平均OD值;
OD_450-PC                  阳性对照血清在450nm波长处的平均OD值。
2、试验成立条件:PC>1.0,且NC<0.2.
3、被检血清样品S/P≥0.57,判定为 PCV2抗体阳性;S/P≤0.44,判定为PCV2抗体阴性;0.44