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新城疫血凝抑制(HI)实验检测实验流程

2026-07-08     来源:广州程淇生物     点击次数:43

方案摘要:本方案基于 Fluidot 24 道自动移液工作站,应用于新城疫血凝抑制(HI)实验检测。工作站凭借 24 通道同步精准移液与梯度稀释功能,实现样本、抗原及红细胞悬液的自动化加样,可规避人工操作误差,同时,降低职业暴露风险,显著提升检测效率、准确性及安全性,适用于规模化批量检测场景。
 
方案详情:
一、实验原理
新城疫病毒(HI 实验)检测基于病毒表面血凝素 - 神经氨酸酶蛋白的血凝特性。病毒可特异性结合鸡红细胞表面唾液酸受体,使其凝集。若待检血清含抗 NDV 抗体,会与病毒结合,阻断病毒与红细胞结合,抑制血凝现象。通过倍比稀释血清并观察血凝抑制情况,可检测血清中抗体水平,用于评估疫苗免疫效果、临床诊断等,操作简便,是禽群新城疫抗体监测常用方法。
二、实验准备
1、设配和材料
① 微型振荡器。
② Fluidot 24 道自动移液工作站及配套耗材。
③ 96孔血凝板。
 
  1. 试剂和材料
① PBS。
② 1%鸡红细胞悬液(RBC)。
③ 新城疫病毒标准阳性抗原。
④ 新城疫病毒标准阳性血清。
⑤ 新城疫病毒标准阴性血清。
 
三、实验步骤
1、使用fluidot 24道移液工作站,取16个吸头,采用连续分液模式,在96孔V型血凝板中,每孔加入25μLPBS,自动丢弃吸头。
 
2、工作站自动移取8个吸头,在第1列的孔中加入25μL抗原或病毒悬液,自动混匀3次-5次。
3、将抗原或病毒悬液在96孔板上进行系列倍比稀释,即从第1列的孔中吸取25μL悬液至第2列,混匀后再吸取25μL悬液至第3列,依次进行倍比稀释到第11列,最后从第11列的孔中吸取25μL弃去,丢弃吸头,第12列的孔中不加抗原或病毒悬液,作为PBS对照。
4、仪器自动取16个吸头,每孔加入25 μL PBS。
5、自动更换新吸头,每孔加入25μL体积分数为1%的鸡红细胞悬液(将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入)。将96孔板在微型振荡器振荡混匀或轻扣反应板混匀反应物,室温静置20min~30min或2℃~8℃静置60min,当对照孔(第12列的孔)红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
五、结果判定
将96孔板倾斜,观察红细胞有无泪珠状流淌。以完全凝集(不流淌)的最高稀释倍数为抗原或病毒悬液的血凝效价。完全凝集的病毒的最高稀释倍数为1个血凝单位(HAU)。
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