方案摘要：本方案聚焦 Fluidot 自动移液工作站在动物布鲁氏菌病微量法补体结合试验中的应用，旨在解决传统人工检测存在的误差大、效率低、污染风险高等问题。该工作站凭借精准移液操作，可将误差控制在极小范围，确保布鲁氏菌抗原、血清、补体等试剂添加精准，保障试验结果的重复性与准确性。其高效样本处理能力凸显，单次可处理大量样品实现高通量检测，自动化流程控制可自动完成移液、稀释等复杂操作，降低人为错误，通过应用该工作站，能实现检测流程标准化，节省人力与时间成本，为动物布鲁氏菌病的防控和监测提供可靠数据支持，适合养殖场、疾控中心等机构大规模检测需求。
 
方案详情：
一、实验原理
动物布鲁氏菌病检测微量法补体结合试验，基于抗原 - 抗体与补体的竞争结合原理。体系含待检血清、布鲁氏菌抗原、补体及指示系统（绵羊红细胞 + 溶血素）。若血清含抗体，会先与抗原结合并消耗补体，指示系统不溶血（阳性）；无抗体则补体与指示系统结合，导致溶血（阴性）。微量法用 96 孔板，通过倍比稀释判效价，适合大规模筛查。
 
二、‌实验准备
1、设配和材料
① 水浴锅（温控范围为 37 ℃~38 ℃和 54 ℃~64 ℃）。
② Fluidot自动移液工作站FDT-M24-12-300和灭菌吸头。
③ 96孔U形聚苯乙烯板。
④ 稀释用器皿。
2、试剂和材料
① 稀释液：巴比妥缓冲液（1×）或不含巴比妥缓冲液。
② 绵羊红细胞悬液，除使用商品化绵羊红细胞外。
③ 布鲁氏菌阳性对照血清和阴性对照血清。
④ 溶血素，在有效期内根据说明书标示效价使用。
⑤ 补体，每次补体结合试验时，应于当日测定补体效价。优先使用商品化冻干补体，也可使用新鲜豚鼠血清作为补体。
⑥ 抗原，在有效期内根据说明书标示效价进行使用。
⑦ 溶血标准比色管。
 
三、实验步骤
1、每次试验应设阳性血清、阴性血清、抗原、致敏红细胞和补体对照。补体结合试验各要素添加量和顺序见表5，具体操作按以下试验程序：
a） 启动fluidot自动移液工作站，设置好移液程序，将血清样品稀释，96 孔板第 1、2排作为血清抗补体对照，血清稀释度为 1/2、1/4；从第3排到第8排血清样品稀释度分别为 1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64，按如下步骤操作：
1）Fluidot自动移液工作站自动取12个吸头，在第1排每孔分别加 50μL稀释液，第 2、4、5、6、7、8排每孔分别加稀释液 25 μL，自动丢弃吸头;
 
2） 取吸头，在第1排每孔加 50 μL灭能血清，自动混匀，混匀后吸取 25μL，加入其后的第2排孔，混匀后弃去 25 μL;
3）取吸头，从第1排孔混匀液体中先后各吸取 25μL，分别加入同列的第3排、第4排孔，自动混匀;
4）从第4排起倍比稀释，即从第4排孔吸取液体 25 μL，到同列第5排孔，混匀，以此类推到第8排;
5）第8排孔吸取 25 μL 液体弃去，丢弃吸头。
b）加抗原，除第1排、第2排外，上述每孔分别加工作量抗原25μL。
c）加补体，上述每孔分别加工作浓度补体 25 μL，轻轻混匀，置 4 ℃孵育过夜或 37 ℃孵育 30 min。
d）制备致敏红细胞，将 2.5%红细胞及溶血素等体积混匀至室温 20 min。
e）孵育，将孵育过夜的 96 孔板从冰箱取出置 37 ℃孵育 10 min。
f）加致敏红细胞，上述每孔加入 50 μL致敏红细胞，自动混匀，37 ℃孵育 30 min。注：以上每个操作都需更换新吸头。
g）在室温条件下1000g离心5min~10 min，或者在 2℃~8 ℃放置 2h~3h让细胞自然沉降，观察判定。
 
 
四、结果判定
1、满足下列条件，试验成立：
阳性血清的抗补体对照、阴性血清对照、阴性血清抗补体对照、抗原对照和补体对照呈完全溶血反应，致敏红细胞对照是完全抑制溶血反应。

1. 满足试验成立条件，将待检血清孔与溶血标准比色孔进行比色，记录结果，并按表6，将溶血抑制的百分比换算成标准的国际单位。结果判定标准：待检血清的溶血抑制程度>20 IU/mL判为抗体阳性。