方案摘要：本方案旨在将RAYPA培养基自动制备分装仪应用于生活饮用水大肠埃希氏菌多管发酵法检测流程，通过仪器实现EC-MUG培养基的自动化制备、精准分装及一体化灭菌前处理，替代传统手动操作。结合大肠埃希氏菌β-葡萄糖醛酸酶分解荧光底物的特性，优化实验流程，提升检测效率、重复性及无菌保障水平，为生活饮用水大肠埃希氏菌检测提供高效可靠的技术方案。
 
方案详情：
一、实验原理
       采用总大肠菌群多管发酵法初发酵阳性的培养物作为待检样本，接种至经RAYPA培养基自动制备分装仪标准化制备的EC-MUG培养基中。大肠埃希氏菌可产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），该酶能特异性分解培养基中的荧光底物并释放荧光产物。培养完成后，通过366nm紫外灯照射观察荧光反应，结合阳性管数查MPN表，实现生活饮用水中大肠埃希氏菌的定性及定量检测。RAYPA仪器的标准化制备流程可保障培养基成分均一性，有效降低底物分解效率的批次差异，提升检测准确性。
二、实验准备
1、培养基和试剂
① EC-MUG培养基
 
2、仪器与设备
① 紫外灯：6W，波长为366nm；
② 培养箱；
③ 电子天平；
④ 平皿：直径9CM；
⑤ 无菌试管：约15MM×160MM；
⑥ 锥形瓶：1000ML；
⑦ 小倒管；
⑧ 接种环；
⑨ RAYPA培养基自动制备分装仪。
 
三、实验步骤
1、根据检测样本量，按EC-MUG培养基配方计算各成分用量，用电子天平精确称量后，加入到RAYPA培养基自动制备分装仪中，溶解搅拌后，仪器自动灭菌，定量分装至试管中。
 
2、将接种后的EC-MUG管放入已预热至44.5℃±0.5℃的培养箱中，密闭培养24h±2h，培养期间避免频繁开箱，确保温度稳定。
四、结果报告
1、培养结束后，取出EC-MUG管，在暗室或遮光条件下用366nm紫外灯照射试管侧壁，观察是否产生蓝色荧光。若试管内出现明显蓝色荧光，判定为EC-MUG阳性，表明水样中含有大肠埃希氏菌；无蓝色荧光则为阴性。
2、统计所有检测样本中EC-MUG阳性的试管数量，根据多管发酵法对应的样本接种量及稀释梯度，查阅大肠埃希氏菌MPN表，计算得出水样中大肠埃希氏菌的MPN值，检测结果以“MPN/100mL”为单位进行报告。
3、每批次实验需同时设置阳性对照和阴性对照，阳性对照应出现蓝色荧光，阴性对照无荧光，否则实验结果无效，需重新进行检测。