方案摘要：本方案意在明确Pipetty电动移液器于马流感AC - ELISA（抗原竞争酶联免疫吸附试验）里的具体应用流程，规范实验操作步骤，借助该移液器精准、高效、能连续分液的优点，降低移液误差，提高实验结果的准确性与重复性，为马流感病毒（EIV）抗原的快速、精确检测提供标准化实验依据。
 
 
方案详情：

• 实验原理

将 EIV 单克隆抗体包被在微孔板上，加入待检样品与酶标抗体，样品中的 EIV 抗原会与酶标抗体竞争结合包被抗体。若样品为阳性，竞争结合导致酶标抗体无法固定，显色浅或不显色；若为阴性，酶标抗体正常结合，底物显色深。
 
 
二、‌实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-20、MSIC01-03-250、MSIC01-03-1000；
② 酶标仪；
③ 恒温箱；
④ 微孔板快速振荡器。
 
2、试剂和材料
① 阳性对照，EIV鸡胚/细胞培养物、感染EIV的阳性组织样品均可作为阳性对照；
② 阴性对照(PBS）；
③ 洗涤缓冲液PBST；
④ 封闭液；
⑤ 酶标抗体稀释液；
⑥ TMB底物溶液(商品化试剂)；
⑦ 终止液；
⑧ EIV单克隆抗体包被板；
⑨ 酶标抗体。
 
 
三、实验步骤
1、将拭子样品充分捻动、挤干后，使用Pipetty电动移液器设置连续分液功能，每次吸取总量200μL样品液加入抗体包被板，每份样本加2个孔，每孔100μL。每块包被板设阴性对照和阳性对照各2孔，每孔100μL。盖好包被板，置37°C恒温箱内作用30 min。
 
2、弃去孔内液体，每孔加入PBST 250μL。孵育3min,弃去PBST,重复洗涤4次，每次拍干。
3、使用Pipetty，用酶标抗体稀释液将酶标抗体稀释至工作度(1μg/mL),连续分液模式，每孔加100μL，置37°C作用30min，弃去孔内液体，每孔加入PBST 250μL,孵育3min,弃去PBST,重复洗涤4次，每次拍干。
4、每孔加新配制的TMB底物溶液100μL，在22℃(±2℃)下避光反应5min。
 
5、每孔加终止液50μL。轻微振荡混合均匀后，置酶标仪中，在波长为450nm 下读取OD值(OD),应在加入终止液后5min内完成读数。
 
 
四、结果判定
1、结果成立条件：阳性对照 OD_450nm>0.5;阴性对照OD_450nm≤0.1。
2、阳性：检测样品OD_40nm≥0.12时，判定为EIV抗原阳性。
3、阴性：待检样品OD450nm<0.12时，判定为EIV抗原阴性。