方案摘要：本方案围绕猪口蹄疫SPC-ELISA全流程，依托 Pipetty 电动移液器精准移液、微量分液及程序记忆等核心优势，对批量加样、梯度稀释、微量试剂添加等关键步骤进行优化。仪器匀速稳定的吸排液与精准控量，可有效避免手动操作中力度不均、速率不一及手部抖动造成的体积偏差，减轻长时间实验疲劳，提高检测重复性与孔间均一性，确保实验结果稳定可信，为口蹄疫血清抗体检测、疫病筛查及流行病学监测提供标准化、可追溯的操作方案，显著提升检测效率、减少实验误差、规范检测流程。
 
 
方案详情：
一、实验原理
       猪口蹄疫 SPC-ELISA 采用固相竞争酶联免疫吸附原理。将口蹄疫病毒抗原包被于固相载体，待检血清与酶标抗体同时加入，血清中特异性抗体与酶标抗体竞争结合固相抗原。洗涤后加入底物显色，待检抗体含量越高，显色越浅。通过吸光度值判定结果，可快速、定量检测猪血清中口蹄疫病毒抗体水平，适用于疫苗免疫评估与流行病学监测。
二、‌实验准备
1、器材
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-20、MSIC01-03-250、MSIC01-03-1000及吸头；
② 酶标仪。
③ 与96孔酶标板配套使用的旋转振荡器。
④ 恒温培养箱。
⑤ 洗板机或洗涤瓶。
⑥ 96孔平底聚苯乙烯酶标板。
⑦ “U”型96孔稀释板。
⑧ 贮液槽。
⑨ 封板膜。
 
 
 
2、试剂
① 捕获抗体；
② 检测抗体；
③ 对照抗原、对照血清；
④ 被缓冲液；
⑤ 样品稀释液；
⑥ 酶标抗体稀释液；
⑦ 洗涤缓冲液；
⑧ 底物溶液；
⑨ 终止液；
⑩ 兔抗豚鼠IgGHRP标记物。
 
      
 
三、实验步骤
1、使用Pipetty电动移液器，设置M连续分液模式，酶标板每孔等量加入50uL pH9.6碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液稀释的兔抗血清包被，封板膜封板，置4°C过夜。
 
2、用洗涤缓冲液洗板5次。
3、酶标板每孔用Pipetty等量加入50uL pH9.6碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液稀释的FMDV灭活抗原，封板膜封板，置4°C过夜。
4、用洗涤缓冲液洗板5次。
5、在“U”型 96孔稀释板内,使用Pipetty连续分液模式，按50uL/孔量用样品稀释液将待检血清从1:4开始做2倍连续稀释，每份待检血清都做2个重复，然后整体平移至已包被抗体抗原复合物的ELISA反应板中。向每孔内加入相应的50uL同型酶标单抗工作液，封板混合后，置37°C孵育30min。加入酶标抗体工作液后血清的实际稀释度变为从1:8开始的2倍连续稀释度。
6、洗板5次,用Pipetty每孔加 50uL TMB底物溶液。37 °C温育15 min后,每孔再加 50uL 2 mol/L硫酸终止反应，混匀后在酶标仪OD_450nm波长下判读结果。
 
7、对照设立:每次试验，每块板设8孔连续2倍稀释的阳性血清对照、2孔连续2倍稀释的阴性血清对照，以及不加血清稀释液的4孔酶标单抗对照。
 
四、试验成立条件
      在酶标仪OD_450nm波长处，测定酶标板的每孔光吸收值，求出每份被检血清和同板酶标抗体对照的平均光吸收值。酶标抗体对照孔的OD_450nm值应大于1.0;阳性血清抗体滴度应在1:512~1:2048范围内;阴性血清对照滴度应小于1:8
五、结果判定

1. 以酶标抗体对照孔平均OD_450nm值的60%为临界值，被检血清OD_450nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于或等于临界值的孔为阳性孔。以阳性孔的最高稀释倍数为被检血清的抗体滴度。
2. 被检血清抗体滴度大于或等于1:64判为阳性。被检血清抗体滴度小于或等于1:32判为阴性。被检血清抗体滴度介于1:32和1:64为可疑·需再次测定;若再次测定抗体滴度大于或等于1:64判为阳性，小于1:64判为阴性。