方案摘要：本方案覆盖猪圆环病毒阻断 ELISA 全套试验流程，依托 Pipetty 电动移液器精准定量、程序记忆特性，标准化优化试剂调配、批量加样等关键步骤。利用抗原抗体竞争性结合反应判定抗体水平，设备高精度移液可规避人工操作偏差，减轻长时间实操劳损。有效保障实验重复性与批次检测稳定性，统一规范操作流程，为圆环病毒感染排查、免疫抗体评估及疫病流调，提供精准可靠的实验保障。
 
方案详情：
一、实验原理
阻断 ELISA 依托抗原抗体特异性结合特性检测猪圆环病毒抗体。微孔板预先包被病毒抗原，先加入待测血清，样本中特异性抗体可占据抗原结合位点。再加入酶标标记的阳性抗体，若样本含对应抗体，会阻断标记抗体结合。添加底物显色后，显色程度与样本抗体含量负相关，据此判定抗体阳性与否，可用于畜禽圆环病毒感染筛查与免疫抗体评估。
二、实验准备
1、器材
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-20、MSIC01-03-250、MSIC01-03-1000及吸头；
② 酶标仪；
③ 恒温培养箱；
④ 洗板机；
⑤ 96孔酶标板。
 
2、试剂
① 包被液；
② 洗涤液；
③ 封闭液及抗体稀释液；
④ 酶标二抗:HRP-山羊抗猪IgG抗体；
⑤ TMB底物液；
⑥ 终止液；
⑦ 包被抗原:重组PCV2Cap蛋白；
⑧ PCV2阳性对照血清；
⑨ PCV2阴性对照血清。
 
 
三、实验步骤
1、用包被液将重组PCV2 Cap蛋白稀释至终浓度2g/mL，使用Pipetty，每孔100uL包被 96孔酶标板，37°C孵育2h。
2、弃去板中液体，用洗涤液洗涤酶标板，每孔300uL洗涤3次，每次3min,最后一次洗完后，将酶标板在吸水材料上拍干。
3、使用Pipetty电动移液器连续分液模式，每孔加入200uL封闭液，于37°C封闭3h。弃去板中液体.将酶标板在吸水材料上拍干。
4、弃去板中液体，洗涤酶标板，加入抗原保护剂，用Pipetty连续分液模式，每孔100uL，置37°C作用1h。
 
5、酶标板置37°C晾干，用锡箔纸真空包装，密封。
6、用抗体稀释液将PCV2阳性对照血清、PCV2阴性对照血清和待检血清分别做2倍稀释，100 uL/孔加入酶标板中，37°C孵育30min,洗涤酶标板。
7、用抗体稀释液将HPR-PCV2单克隆抗体稀释至工作浓度，100uL/孔加入酶标板中,37°C孵育30min，洗涤酶标板。
8、使用Pipetty电动分液器，连续分液模式，每孔等量加入100 uLTMB底物液，37°C避光孵育15 min。
 
9、使用Pipetty电动分液器，连续分液模式，每孔等量加入50uL终止液，终止显色反应。
10、在酶标仪450nm波长处读取各孔 OD值，15min内完成。

• 结果判定

1、计算阳性对照平均OD值、阴性对照平均OD值,以及被检血清样品的阻断率(PI)。被检血清样品PI值按照公式(2)计算:

式中:
PI               样品抑制率;
OD_450-S             待检血清样品在450 nm波长处的OD值;
OD_450-NC             阴性对照血清在450nm波长处的平均OD值。
2、试验成立条件:PC<0.4,且NC>0.7。
3、被检血清样品P1≥38%，判定为PCV2抗体阳性；PI≤30%,判定为PCV2抗体阴性；30%