方案摘要：本方案旨在通过血凝试验（HA）定性检测犬细小病毒（CPV）、定量测定病毒血凝效价，为临床诊断与病毒研究提供依据。本实验操作简便、成本低、3-4 小时出结果，可用于 CPV 临床初筛、病毒载量评估及疫苗质控，但需注意其特异性与灵敏度有限，需结合 PCR、临床症状等互补验证，避免假阳 / 假阴性误判。为提升实验效率，实验采用了Pipetty电动移液器，这款移液器拥有轻便小巧的特点，重量仅 75g，操作起来十分舒适。同时，它具备高精度的等量连续分液能力，能够按照设定的移液量进行多次重复排液，并且配备了温度控制功能，可避免因手部热量影响而导致的精度降低。
 
方案详情：
一、实验原理
      犬细小病毒 HA 实验核心基于犬细小病毒（CPV，尤其 CPV-2 型及变异株）的血凝特性。CPV 衣壳表面含血凝素蛋白，该蛋白可特异性结合猪或恒河猴红细胞表面的对应受体，引发红细胞凝集反应 —— 即红细胞不再均匀悬浮，聚集成团并铺展；若样本无 CPV 或病毒量极低，红细胞则因重力沉淀为规则小圆点。实验通过梯度稀释待检样本，加入新鲜红细胞悬液孵育后，观察红细胞状态：凝集为阳性（提示含 CPV），沉淀为阴性。同时，以能引起完全凝集的样本最高稀释倍数作为血凝效价，间接反映样本中 CPV 的载量，为后续定性判断与定量评估提供依据。
二、‌实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC01-02-1000及配套吸头；
② 冰箱（4 ℃、20 ℃、-70 ℃）；
③ 恒温培养箱（5℃~100℃）；
④ 微型混合器；
⑤ 96孔V形微量反应板。
 
2、试剂和材料
① PBS；
② 1%猪红细胞悬液；
③ CPV标准阳性血清。
 
三、实验步骤
1、使用Pipetty电动移液器连续分液功能，设置单次分液量为25μL，分液次数12次，在96孔V形微量反应板上，第1孔~第12孔中分别加入25μL PBS。
 
2、设置单次移液模式，取处理好的待检样品25μL加入左侧第1孔，按UP键，进入混匀模式，混合均匀后，吸出25μL至第2孔，混合均匀后，吸出25μL至第3孔，依次倍比稀释，至第11孔，混合均匀后，吸出25μL弃掉，第12孔作为PBS 对照孔。
3、设置连续分液模式，每孔加 25 μLPBS。
4、由左至右依次向每孔加入25μL 1%猪红细胞悬液，置于微型混合器上振荡10s，使红细胞与待检样品充分混合，在4℃条件下静置30min~60min，待PBS对照孔红细胞呈显著纽扣状时可观察结果。
四、结果判定
将96孔V形微量反应板倾斜，观察红细胞有无泪珠状流淌。以使红细胞100%凝集（完全无泪珠状流淌）的最高稀释倍数作为该病毒的血凝效价，即一个血凝单位，判定待检样品的病毒血凝效价。