方案摘要：犬细小病毒 HI 实验是检测犬血清中 CPV 特异性抗体的经典血清学方法，核心用于评估犬只免疫状态、追溯既往感染，不直接检测病毒抗原。为提升实验效率，实验采用了Pipetty电动移液器，这款移液器拥有轻便小巧的特点，重量仅 75g，操作起来十分舒适。同时，它具备高精度的等量连续分液能力，能够按照设定的移液量进行多次重复排液，并且配备了温度控制功能，可避免因手部热量影响而导致的精度降低。
 
方案详情：
一、实验原理
       犬细小病毒 HI 实验核心基于犬细小病毒（CPV）的血凝特性与特异性抗体的抑制作用，用于检测血清中 CPV 特异性抗体。首先，CPV（尤其 CPV-2 型及变异株）可特异性结合猪红细胞表面受体，使红细胞脱离悬浮状态、聚集成团，形成肉眼可见的絮状沉淀，此为 “血凝反应”。若待检血清中存在 CPV 特异性抗体，抗体将优先与 CPV 结合形成抗原 - 抗体复合物，占据 CPV 上能结合红细胞的位点，从而阻断 CPV 与红细胞的相互作用，抑制血凝反应发生。实验中通过对血清进行倍比稀释，观察不同稀释度下是否出现血凝抑制，可确定 “完全抑制血凝的最高血清稀释度”，即 CPV 抗体滴度，以此量化血清中 CPV 抗体的水平。
 
二、‌实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC01-02-1000及配套吸头；
② 冰箱（4 ℃、20 ℃、-70 ℃）；
③ 恒温培养箱（5℃~100℃）；
④ 微型混合器；
⑤ 96孔V形微量反应板。
 
2、试剂和材料
① PBS；
② 1%猪红细胞悬液；
③ CPV标准阳性血清。
 
三、实验步骤
1、根据测定好的病毒血凝效价，配制4个血凝单位（4HAU）病毒液。若血凝的终点滴度为1:256，则4HAU=256/4=64（即1:64），即通过1:64稀释获得4HAU病毒液。
2、使用Pipetty电动移液器，设置M连续分液模式，在96孔V形微量反应板上，第1孔~第11孔中各加入25μLPBS。在第12孔加入50μL PBS作为红细胞对照。
 
3、使用单次分液模式，取25μL CPV阳性血清加入左侧第1孔，按UP键进入混匀模式，自动混匀后，吸出25μL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，从第10孔中吸出25μL弃掉。
 
4、使用M连续分液模式，在第1孔~第11孔中加入配制好的4HAU病毒液 25μL，置于微型混合器上振荡10s，混合均匀，在37℃条件下静置60min。第11孔作为4HAU病毒液对照。
5、使用M连续分液模式，由左至右依次向每孔加入25μL 1%猪红细胞悬液，置于微型混合器上振荡10s，混合均匀，在4℃条件下静置30min~60min，待第11孔4HAU病毒液对照孔出现红细胞100%凝集时可观察结果。
四、结果判定
将96孔V形微量反应板倾斜，观察4HAU病毒液血凝性是否被CPV阳性血清特异性抑制，红细胞有无泪珠状流淌。当4HAU病毒液对照孔红细胞完全凝集，PBS对照孔红细胞呈现泪珠状流淌，则试验成立。能被CPV阳性血清抑制血凝者，判为CPV阳性；不能被CPV阳性血清抑制血凝者，判为CPV阴性。