方案摘要：本方案结合 Pipetty Pro电动移液器核心优势优化操作流程。以玻璃酸钾为底物，借助该移液器 75g 超轻机身与笔式操作设计，可非等量连续分液，并提供微孔板导航功能，可一次性精准移取不同体积标准品、供试品及试剂配制溶液，适配多品牌吸头适配性强。利用其高精度连续分液功能快速搭建反应体系，温度自动补偿技术可避免手热导致的分液量偏差。经 37℃孵育 30 分钟、血清反应后，640nm 测吸光度，依标准曲线计算效价。全程提升移液效率与准确性，显著增强实验重复性。
 
方案详情：
一、实验原理
      以经五氧化二磷干燥的玻璃酸钾为底物，在 37℃±0.5℃水浴中，玻璃酸酶（标准品 / 供试品）催化其降解为小分子寡糖。反应 30 分钟后，加入牛血清溶液 —— 未降解的大分子玻璃酸钾会与血清蛋白结合形成稳定浊液，降解产物则不结合；浊度高低与未降解底物量正相关，在 640nm 波长下表现为吸光度差异（酶活性越高，未降解底物越少，吸光度越低）。以标准品效价与吸光度绘标准曲线，供试品吸光度对照曲线查得效价，进而计算其单位活性。
 
二、‌实验准备
1、设配和材料
① PipettyPro电动移液器；
② 恒温水浴锅；
③ 玻璃试管；
④ 分光光度计。
 
2、试剂和材料
① 醋酸-醋酸钾缓冲液
② 磷酸盐缓冲液
③ 水解明胶；
④ 水解明胶稀释液 ；
⑤ 血清贮备液；
⑥ 血清溶液 ；
⑦ 玻璃酸钾贮备液；
⑧ 玻璃酸钾溶液；
 
三、实验步骤
1、标准品与供试品溶液制备
① 标准品溶液：使用Pipetty电动移液器，称取标准品，加冷的水解明胶稀释液，制成 1.5U/mL的溶液。
② 供试品溶液：按标示量称取供试品，同法用移液器稀释至约 1.5U/mL，避免产生气泡。
2、标准曲线制备
① 取 12 支同规格试管，标记序号，用PipettyPro非等量电动移液器，在小程序上设置每次的分液量0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL（各 2 支平行），并储存，即可无需切换量程，进行连续加样操作（每管间隔 30 秒操作），对应补加水解明胶稀释液至 0.50mL。
 
② 设置连续分液模式，每管间隔 30 秒加入玻璃酸钾溶液 0.50mL，设置混匀模式吹吸 3 次，立即置 37℃±0.5℃水浴。
③ 准确保温 30 分钟后，每 30 秒取出 1 管，立即加入血清溶液 4.0mL，摇匀后室温放置 30 分钟。
④ 空白组：磷酸盐缓冲液 0.50mL + 水解明胶稀释液 0.50mL，同法操作。
⑤ 用分光光度计在 640nm 测吸光度，以吸光度为纵坐标、标准品效价为横坐标绘标准曲线。
3、供试品测定
① 取6支试管，标记供试品组，用连续分液模式加样：
② 使用Pipetty Pro电动移液器，在小程序上设置好每次的分液量和次数，供试品溶液 0.20、0.30、0.40mL（各 2 支平行），对应补加水解明胶稀释液至 0.50mL。
 
③ 同标准曲线步骤，加入玻璃酸钾溶液后水浴30分钟，加血清溶液反应，测吸光度。
④ 从标准曲线查得效价，除以供试品重量（mg），取6份平均值即为效价（单位 /mg）。
四、结果判定
1、标准曲线的 “吸光度 - 效价” 线性回归方程的决定系数（R²）需≥0.990，且各标准品浓度点的吸光度偏差≤±10%（即实际吸光度与理论拟合吸光度的差值不超过理论值的 10%）。
2、平行样精密度合格供试品组中，同一取样体积的 2 支平行管（如 2 支 0.20mL 供试品管）的吸光度差值需≤0.05（640nm 波长下），对应的单位重量效价相对偏差≤5%；6 支供试品管的整体相对标准偏差（RSD）需≤8%。
3、空白对照结果正常空白组的吸光度需稳定在 “0.100±0.020” 范围内，且无明显浊度异常。
4、每毫克供试品的效价不得低于 150U。若最终计算的平均效价≥150U/mg，判定为合格；若＜150U/mg，判定为不合格。
5、异常结果处理若最终效价超出预期范围，排查后需重新取样、重新测定，确保结果可靠。