方案摘要:本方案采用福林酚法测定蛋白质含量,核心通过对照品建立线性关系计算供试品浓度,利用 Pipetty 电动移液器提升实验精准度与效率。实验中需精密量取去氧胆酸钠、福林酚试液等多规格试剂,Pipetty 凭借精度高,量程广,连续分液一致性强的优势,确保量取误差最小化。其独家温度控制功能可自动补偿手部热量导致的分液偏差。连续分液模式大幅提升多管对照品处理效率,适配通用吸头降低操作成本。最终通过精准移液保障吸光度数据可靠,为线性回归及含量计算提供坚实支撑。
方案详情:
一、实验原理
核心原理是蛋白质与显色剂的特异性反应及吸光度与浓度的线性关系。首先,去氧胆酸钠辅助蛋白质溶解,72% 三氯醋酸通过变性作用使蛋白质沉淀,实现与杂质分离;沉淀用试液 C 复溶后,蛋白质肽键先与试液中成分反应,再与福林酚试液(含磷钼酸 - 磷钨酸)作用,生成蓝色复合物。该复合物在 750nm 波长下的吸光度,与蛋白质浓度呈正比。通过对照品溶液建立浓度 - 吸光度线性回归方程,代入供试品吸光度,即可计算其浓度,再乘以稀释倍数,得到最终蛋白质含量。
二、
实验准备
1、设配和材料
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-1000、MSIC90-001-10mL;
② 紫外-可见分光光度计;
③ 玻璃试管;
④ 台式离心机;
⑤ 涡旋振荡器。
2、试剂和材料
① 蛋白质对照品溶液;
② 福林酚试液;
③ 试液C;
④ 去氧胆酸钠试液;
⑤ 72% 三氯醋酸溶液;
三、实验步骤
1、使用Pipetty电动移液器,精密量取各浓度对照品溶液 1.0mL,分别移入玻璃试管中。
2、设置连续分液模式,每管加入去氧胆酸钠试液 0.1mL,涡旋混匀后,室温放置 10 分钟。
3、加入72% 三氯醋酸溶液 0.1mL,涡旋混匀,在3000g 条件下离心 30 分钟。
4、轻轻倒出上清液,用吸管彻底移除剩余液体,保留蛋白质沉淀。
5、向沉淀中加入试液 C 1mL复溶,溶解后再加入试液 C 5mL,混匀,室温放置 10 分钟。
6、加入福林酚试液 0.5mL,立即混匀,室温放置 30 分钟。
7、照紫外 - 可见分光光度法,在750nm 波长处测定吸光度,同时以 “0 号管”(不含对照品的空白体系)作为空白校正。
8、以对照品溶液浓度为横坐标(X)、对应吸光度为纵坐标(Y),计算线性回归方程(Y = aX + b)。
四、结果判定
1、精密量取供试品溶液 1.0mL,完全重复上述对照品的步骤 ,测定其吸光度。
2、将供试品吸光度代入对照品的线性回归方程,计算出供试品溶液中的蛋白质浓度。
3、用计算得到的浓度乘以供试品的稀释倍数,即为供试品中蛋白质的实际含量。