方案摘要：本方案以多杀性巴氏杆菌引发的牛出血性败血症为检测对象，采用对流免疫电泳技术开展病原血清型鉴定工作，实验中全程使用Pipetty系列电动移液器完成抗原、抗血清及对照溶液的精准定量加样，保证各组样本、阳性及阴性对照加样体积均一、误差可控，有效规避手动移液偏差导致的电泳沉淀线模糊、假阳性、假阴性等问题，提升牛出血性败血症病原检测与血清分型结果的准确性、重复性和标准化程度，适用于实验室快速检测与菌株鉴定。
 
方案详情：
一、实验原理
对流免疫电泳是基于抗原、抗体电泳迁移特性与特异性免疫结合的快速检测技术，依托巴比妥缓冲液体系维持稳定的电泳pH环境与离子强度。在常规电泳缓冲液pH条件下，多杀性巴氏杆菌荚膜抗原带负电荷，电泳过程中会向正极移动；而对应的特异性抗血清抗体因分子量大、电渗作用显著，会向负极逆向移动。
二、实验准备
1、设配和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
     ① Pipetty电动移液器MSIC01-03-20，MSIC01-03-250，MSIC01-03-1000；
     ② 电泳仪。 

1. 主要试剂

① 对流免疫电泳介质；
② 巴比妥缓冲液；
③ 琼脂凝胶平板。
 
三、实验步骤
1、将 12 mL 电泳介质倾注玻板（57 mm×70 mm），制成琼脂凝胶平板，冷却后使用。
2、按照图 2 所示打孔，一排 7 孔，孔径 4 mm，孔间距 7 mm，挑去孔内琼脂，封底。另外设一排平行组。
 
3、使用Pipetty电动移液器，同一组加样孔中，在阴极端的孔中加入 20 µL 荚膜抗原，再使用Pipetty在阳极端的孔中加入等量的抗血清。对照组分别用 0.85% NaCl 溶液与阳性抗血清配对；荚膜抗原与阴性兔血清配对。
4、电泳槽装满巴比妥缓冲液，150 V（25 V/cm）电泳 30 min，观察抗原和抗血清孔之间出现的沉淀线。
 
 
四、结果判定
抗原和抗血清孔之间出现明显的沉淀线者判为多杀性巴氏杆菌阳性，不出现沉淀线者判为多杀性巴氏杆菌阴性。根据抗血清的种类，可对待检菌进行多杀性巴氏杆菌的血清型鉴定。